产气荚膜梭菌的化脓隐秘杆菌二联灭活疫苗制备体液免疫效果评价.pdfVIP

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2015-10-27 发布于安徽
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产气荚膜梭菌的化脓隐秘杆菌二联灭活疫苗制备体液免疫效果评价.pdf

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目录目录摘要…………………………………………………………………………………………………。I 英文摘要……………………………………………………………………………………………IlI 1引言………………………………………………………………………………………………1 1．1产气荚膜梭菌病概述………………………………………………………………………．1 1．1．1产气荚膜梭菌…………………………………………………………………………。l 1．1．2产气荚膜梭菌病及临床症状…………………………………………………………．．1 1．1．3产气荚膜梭菌病的防治………………………………………………………………。2 1．2化脓隐秘杆菌病概述………………………………………………………………………．3 1．2．1化脓隐秘杆菌…………………………………………………………………………。3 1．2．2化脓隐秘杆菌病及临床症状…………………………………………………………。3 1．2．3化脓隐秘杆菌病的防治………………………………………………………………。3 1．3多联灭活疫苗的研究进展…………………………………………………………………．4 1．4本研究的目的与意义………………………………………………………………………．．5 2材料与方法………………………………………………………………………………………6 2．1材料………………………………………………………………………………………………………………………。6 2．1．1试验动物…………………………………………………………………………………6 2．1．2质粒、血清、菌株……………………………………………………………………．．6 2．1．3主要试剂及抗体………………………………………………………………………。6 2．1．4主要仪器………………………………………………………………………………．．6 2．2A型产气荚膜梭菌及化脓隐秘杆菌小鼠感染模型的建立…………………………………6 2．2．1 A型产气荚膜梭菌小鼠感染模型的建立………………………………………………6 2．2．2化脓隐秘杆菌小鼠感染模型的建立…………………………………………………．．7 2．3a毒素蛋白及PLO蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立………………………………8 2．3．1a毒素蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立…………………………………………8 2．3．2PLO蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立…………………………………………．8 2．4产气荚膜梭菌和化脓隐秘杆菌灭活条件的优化及免疫佐剂的选择……………………．8 2：．4．1细菌培养………………………………………………………………………………。9 2．4．2灭活条件的优化………………………………………………………………………．．9 2：．4．3免疫佐剂的选择………………………………………………………………………。9 2．5产气荚膜梭菌及化脓隐秘杆菌二联灭活疫苗的制备及体液免疫效果的评价…………10 3结果……………………………………………………………………………………………………………………………．．1l 3．1产气荚膜梭菌及化脓隐秘杆菌生长曲线的绘制…………………………………………11 3．2产气荚膜梭菌及化脓隐秘杆菌小鼠感染模型的建立……………………………………12 3．2．1产气荚膜梭菌小鼠感染模型的建立…………………………………………………12 ：；．2．2化脓隐秘杆菌小鼠感染模型的建立…………………………………………………15 东北农业大学农学硕士学位论文 3．3产气荚膜梭菌ct毒素的粗提和抗原性鉴定…………．…………………………………．．18 3．4化脓隐秘杆菌PLO蛋白的表达纯化及抗原性鉴定……………………………………。19 3．4．1重组PLO蛋白的诱导表达及纯化……………………………………………………19 3．4．2重组PLO蛋白的westernblot鉴定…………………………………………………．20 3．5化脓隐秘杆菌PLO蛋白和产气荚膜梭菌a毒素抗体间接ELISA方法的