功血饮治疗功能性子宫出血药效机理的研究.pdf

要 本论文课题来源于南京市医学科技发展重点项目(ZKX07023)，旨在中医理论的指导 下研究功血饮治疗功能性子宫出血的药效及机理，为本项目后期药品的开发提供科学数据 和研究支撑。本论文主要内容包括以下几个部分t 一．功血饮治疗功能性子宫出血的止血作用及机制研究 通过选取动情期雌性大鼠与雄性大鼠合笼，筛选出怀孕大鼠。于第7天分别灌胃米非 司酮溶液和米索前列醇溶液，造成早孕大鼠不完全流产模型，随机分为模型组，宫血宁组， 功血饮三个剂量组。另取10只早孕大鼠为空白对照组。给药后测定子宫出血量，末次给 药后，选取处于动情间期的大鼠进行眼眶取血，分离血清，大鼠处死后，迅速摘取子宫、 卵巢、肾上腺、脾脏及胸腺并称重，计算其脏器系数，称重后的子宫，置10％福尔马林中 固定，石蜡包埋，切片，HE染色，做组织形态学检查。采用放免法测定血清雌二醇(E2)， mRNA、PR 孕酮(P)水平；采用RT-PCR方法获得大鼠子宫ERmRNA的逆转录表达产 物eDNA，用琼脂糖凝胶电泳方法检测，计算机图像分析系统进行统计分析。结果显示击模 型组大鼠子宫出血量明显增多，与空白对照组比较有显著性差异(PO．01)；功血饮5．5、 脏器系数下降，具有显著性差异(P0．01)。功血饮5．5、1 1、229／kg剂量组与模型组比较， 子宫和卵巢系数均有增加。子宫组织形态学检查也表明功血饮可增加腺体的数目。a功血 mRNA、 g／kg剂量组均能降低ER 饮229／kg能明显升高E2水平(Po．05)。功血饮5．5、1l、22 PR mRNA的表达(P0．05，PO．01)。 通过采用小鼠断尾法及玻片和毛细玻管法观察功血饮对小鼠凝血、出血时间的影响。 结果显示功血饮能明显缩短小鼠出血和凝血时间(PO．01)。 通过采用离体子宫实验法观察功血饮对子宫平滑肌收缩的影响。实验前3d，每天皮 下注射己烯雌酚。实验时颈椎脱臼处死大鼠，剖腹取出子宫，置于与压力换能器相连的麦 氏浴槽中，持续供氧，记录正常收缩曲线10min，然后加入不同浓度的功血饮溶液，分别 记录加入药物后的子宫的活动曲线。此外用缩宫素造模后，观察功血饮对子宫收缩的影响。 结果显示功血饮中剂量、大剂量组可明显增强子宫平滑肌的收缩频率(p0．01)，且呈剂量 依赖性关系，但对子宫收缩的强度影响不大。功血饮各剂量组能增强子宫平滑肌的活动力 子宫异常收缩加强的子宫收缩频率下降(pO．01)。 实验研究表明功血饮能有效减少不完全流产模型大鼠的子宫出血量，增加大鼠性器官 的重量，在一定程度上促进子宫和卵巢发育，调节性激素和子宫内膜Eli．和PR的作用。 此外，功血饮能缩短小鼠出血凝血时间，增强离体大鼠子宫平滑肌的收缩频率，收缩强度 和活动力，对缩宫素所致的子宫收缩加强有一定的抑制作用，表现为收缩频率的降低，收 缩幅度的减小，活动力下降。 二．功血饮含药血清对卵巢颗粒细胞的影响 通过体外培养大鼠卵巢颗粒细胞，培养24h后，加入大鼠含药血清，采用MTT法测 定OD值和放免法测定上清液中E2和P的含量。结果显示功血饮含药血清各剂量组细胞生 长明显提高(pO．01)，表现为促进卵巢颗粒细胞的增殖，促进GC分泌E2和P。 通过体外培养大鼠卵巢颗粒细胞，培养24 uM、10 h后，加入的CdCl2终浓度分别为0 uM、20uM、40uM、60uM、80 uM，37℃、5％C02培养48h后，采用MTT比色法于酶 联免疫测定仪490 提示其呈现剂量依赖性关系。 含药血清对CdCl2损伤的卵巢颗粒细胞的保护作用，放免法观察上清液中E2和P的变化。 保护CdCh对细胞的损伤。 以上系列实验研究表明功血饮含药血清能促进正常卵巢颗粒细胞的增殖和分泌，并能 抑制氯化镉对大鼠卵巢颗粒细胞的损伤，具有保护细胞的作用。 三．功