丙型肝炎病毒抗体胶体金免疫层析法的初步建立.pdfVIP

摘要 丙型肝炎是一种全球性流行的传染病，目前全球患病率约3％，约有1．8亿人感染 C 丙型肝炎病毒(HepatisVirus，rtcv)，而高度慢性化是该病的最大特征。一般来说，急 性HCV感染会显示亚临床状态，并导致慢性的肝脏疾病，患者常在无意识的情况下延 误治疗，从而导致肝硬化和肝细胞癌的发生。目前国内尚无HCV抗病毒特效药物和相 关疫苗。因此，控制HCV感染的形势十分严峻。目前主要靠早发现、早诊断和早治疗 来防控HCV传染源、阻断传播途径，这对HCV的诊断提出较高要求。现在HCV的前 期筛检主要为检测血清中的抗体，主要方法包括：酶联免疫法、聚合酶链反应、重组免 疫印迹等。胶体金免疫层析方法与之相比，操作简单、携带方便、快速、特异，不需要 任何设备和特殊试剂即可得到检测结果，特别适用于现场检测和诊断。 本课题基于胶体金的性质及免疫学原理，研制了一种能够快速诊断HCV抗体的胶 体金免疫层析试纸条。即利用免疫胶体金技术，选择使用柠檬酸三钠还原法制备胶体金， 然后用其标记HCV重组抗原制备成金垫，同时将包被抗原与HCV单抗分别作为检测线 与质控线蛋白包被硝酸纤维素膜，用于血清中HCV抗体的检测。 为制备出特异性、灵敏度、稳定性俱佳的试纸条，在研究过程中，充分考虑了各 种影响因素对试纸条品质的影响。通过对胶体金制备用水、重组抗原的标记浓度、标记 pH值、包被抗原抗体浓度、不同硝酸纤维素膜、不同湿度环境下对包被的影响、不同 粒径大小的胶体金的灵敏度差异等因素进行摸索与探究，最终确定选择超纯水制备粒径 大小约40 stedimCNl40无背衬 nlll的胶体金，标记蛋白浓度为20¨g／mL，采用Sartorius 膜在40％．60％的环境湿度下，质控线和检测线分别包被HCV单抗1mg／mL和HCV重 组抗原1．5mg／mL，建立HCV胶体金双抗原夹心法。 对制备的试纸条进行特异性、灵敏度、稳定性等方面系统检测，并与ELISA检测 方法进行临床比较。 结果表明该免疫胶体金试纸条特异性、灵敏度、稳定性较好，并方便、快捷，与 ELISA法检测对比阳性率与阴性率俱佳。可用于丙肝病毒感染的早期诊断，具有一定的 临床使用价值。 关键词：胶体金，双抗原夹心，免疫层析，丙型肝炎病毒 Abstract Cisa ofinfectiousdiseases．the rateofabout3％．About Hepatitis globalepidemic prevalence of 180000000areinfectedwith the ofthe isthe characteristic HCV,and people height chronicitybiggest subclinical leadtochronicliver thedisease．In HCVinfectionwill the state，and general，acute display to inthecaseofthe leadstheoccurrenceof disease．Patientsoften treatment unconscious，which delay ofantiviralandvaccines．