离子色谱法细菌培养液水溶性代谢物分析中的应用.pdfVIP

lUlIIIIIIIIIIIIIrlllllHillUIII Y2552787 离子色谱法在细菌培养液水溶性代谢物分析中的应用 摘要 细菌培养液中含有一些不可或缺的水溶性物质，包括无机阴阳离子、有机酸、 核苷酸、糖和氨基酸等。从菌种的改良，基因功能的分析和阐述，到细菌体系及 生产工艺的优化，发酵实验的设计等，都需要定量地了解细菌的代谢情况，准确 地测定细菌内的代谢流量数据。因此，精确而高效地测定这些水溶性代谢物意义 重大。 本论文采用单柱离子色谱法定量测定了细菌胞外培养液中一些水溶性代谢 物，为解决单柱分离糖和氨基酸的干扰问题，成功构建了多阀多泵系统。优化了 阀切换及色谱分离条件，实现了糖和氨基酸的准确定量，为胞液复杂样品多组分 的同时测定奠定了良好的基础。 本研究主要包括三部分的内容： 1．采用常规的单柱离子色谱法，分别对细菌培养液中的无机阴阳离子、有机 酸、糖、醇和氨基酸进行了分离分析。 2．建立多阀多泵离子色谱系统，实现自动化操作。完成两阀两泵、三阀三泵、 两阀三泵三套阀切换系统的构建。 3．利用双阀三泵切换系统，实现了热纤梭菌培养液中氨基酸和糖的同时测定。 其中探讨了捕集柱的选择、捕集柱的最佳淋洗条件、阀切换时间条件。以20种氨 基酸和7种糖混合标准品进行了方法评价。得到各标准品的线性相关系数均达到 0．99以上，重复8次进样相对标准偏差在0．5_4．6％之间。新方法成功地应用于无 菌对照培养液和三种形态热纤梭杆菌培养液中氨基酸和糖的检测中，实际样品的 分析结果令人满意。 关键词：离子色谱、阀切换技术、细菌培养液、代谢物、氨基酸、糖 THEAPPLICATION0FION ANAI，YSINGⅥ硝LTER CHROMATOGRAPHY SOLU暇LEⅧTABOLITESINBACTERIA BROTH ABSTRACT inbacteria Therearesome andwatersolublesubstances broth，such indispensable andSOon．To as acids，nucleotides，aminoacids，carbohydrates inorganicions，organic cell and fermentation design improvestrains，analyzegenefunctions，optimizesystems aimto understandthemetabolismofbacteriaand experiment，researchersquantitatively andefficientdeterminationthese determinemetabolicfluxdate．Therefor岛the precise metabolismsisof greatsignificant． Inthis with columnwas to