量子点—生分子复合探针的构建及其在生物分析中的应用.pdf

摘 要 量子点是一种新型的半导体纳米颗粒，是纳米生物光子学重要的工具之一。 量子点作为一种极具应用前景的信号探针，与传统有机荧光染料相比，具有宽而 有效的激发谱，窄而对称的发射谱，高的荧光量子效率，优异的光化学稳定性， 方便灵活的表面可修饰性，以及发射波长尺寸可调等优点。基于这些独特的光学 性质，结合先进的分析检测技术和平台，量子点在生物分析中的应用日益广泛， 包括细胞与组织标记、生物分子跟踪与检测、免疫反应分析等方面，并取得了许 多重要成果。但是，纵观量子点在生物分析领域的应用，大部分的机理都是基于 生物分子之间的特异性相互作用。因此，构建量子点．生物分子复合探针，使量 子点具有特异性靶向作用的同时，保持其荧光强度和稳定性，并且尽量减少其他 生物分子的非特异性吸附，这对于量子点在生物领域的应用，起着尤为关键的作 用。 随着现代医学技术的发展，医学检测中要求化验和检验的仪器具有更高灵敏 度、更短检测时间、更小体积、便携化。而新近发展起来的生物芯片技术，即微 流控芯片技术所具有的优点能够很好地满足这些要求。目前，微流控芯片主要应 用于基因测序、蛋白质图谱分析等高、精、尖领域。随着微流控芯片技术的不断 成熟和制作成本的不断降低，必将大规模地进入到常规医学检测领域，取代那些 笨重而且操作复杂的化验、检验设备，进而促进医疗水平的进步。然而，目前微 流控芯片的检测灵敏度和特异性仍然有待提高。 我们课题组在水相合成高性能量子点方面有很好的基础，利用微波辅助水相 量子点制备技术，制备了优良性能的水分散性量子点。基于这个优势，我们试图 开展一些原创性、有实际意义的研究工作，将量子点信号探针和微流控芯片检测 平台相结合，充分发挥两者的优势，克服彼此的缺陷：即量子点优异的荧光性能， 有助于提高微流控芯片的检测灵敏度，并扩大其应用范围；微流控芯片技术的可 控性、高通量，有利于提升量子点探针的标识能力。本文构建了一系列性能优良 的量子点．生物分子复合探针，并将这些复合探针用于微流控芯片，对生物分子 进行检测。具体研究内容如下： 1．构建了一种新型的微流控芯片检测体系。 这种微流控芯片是由PDMS片层和芯片基片组成。借助此微流控技术平台， 实现了生物分子在固相表面的固定组装、识别、捕获、检测等一系列的生物反应 过程。此芯片制作成本低，易于操作，可实现不同种类、不同浓度的生物分子在 微流控芯片上的快速分析。与传统的微阵列芯片相比，这种微流控芯片技术能够 更好地保持生物分子的活性，样品消耗量很少，不需要昂贵的点样仪，对环境也 没有严苛的要求，并且流体具有可控性，有利于提高生物分子之间的结合效率， 提高检测灵敏度和特异性。 2．构建了量子点一亲和素复合探针，并将这种探针用于微流控蛋白质芯片。 基于静电相互作用，将带相反电荷的量子点和亲和素自组装，形成了量子点 ．亲和素复合探针，并将这种纳米生物复合探针作为信号探针，用于微流控蛋白 质芯片，对肿瘤标志物进行检测。通过实验条件的不断改进和优化，克服了PDMS 微通道和基片对蛋白质的非特异性吸附，减小了量子点对蛋白质的非特异性吸 附，降低了芯片的背景信号，提高了量子点在芯片上的信号强度。实验结果表明， 相对于传统的荧光染料(FITC)，采用量子点作为信号探针，无论是信号强度， 信号稳定性，还是检测灵敏度，都有明显的提高。这是首次将量子点引入到微流 控蛋白质芯片中。量子点在微流控芯片上的优异表现，证实了我们所构建的检测 体系，充分地融合了量子点和微流控技术的优势，为蛋白质的检测和分析提供了 一个新颖而有效的途径。 3．构建了量子点．免疫球蛋白复合探针，并将这种探针用于微流控蛋白质芯 片。 基于共价偶联的机理，将量子点和免疫球蛋白(羊抗鼠二抗)连接，形成了 量子点．免疫球蛋白复合探针。详细地探讨了共价连接对量子点荧光强度和稳定 性的影响，制备得到了有效且稳定的量子点生物探针。本文将这种量子点生物探 针，用于微流控蛋白质芯片，采用夹心免疫分析法，实现了缓冲液和血清中肿瘤 标志物的高特异性、高灵敏度检测；采用反相免疫分析法，实现了混合样品的多 元检测和多色成像。对于真实样本和复杂样本的有效检测，预示着这种检测体系 在临床检测和蛋白质组学研究领域具有强大的应用潜力，为理论研究向实际应用 转换提供了有利的技术支撑。 4．构建了量子点．DNA．生物素．链霉亲和素复合探针，并将这种探针用于微 流控蛋白质芯片。 本文提出了一种新型的以DNA作为“桥梁