牛红霞大论文20120511-6.docVIP

分类号： 密级： 研 究 生 学 位 论 文 论文题目（中文） 结核分枝杆菌亚单位疫苗Mtb10.4-HspX的构建免疫特性和保护效果评价 论文题目（外文） Construction and Evaluation of a multistage Mycobacterium tuberculosis subunit vaccine candidate Mtb10.4-HspX 研究生姓名 学科、专业 研究方向 学位级别 硕 士 导师姓名、职称 论文工作 起止年月年月至年月 论文提交日期 年月 论文答辩日期 年月 学位授予日期 校址：甘肃省兰州论文作者签名： 日 期： 关于学位论文使用授权的声明 本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大学。本人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为兰州大学。 本学位论文研究内容： □可以公开 □不易公开，已在学位办公室办理保密申请，解密后适用本授权书。 （请在以上选项内选择其中一项打“√”） 论文作者签名： 导师签名： 日 期： 日 期： 结核分枝杆菌亚单位疫苗Mtb10.4-HspX的构建及免疫特性和保护效果评价 摘要 ,是人类健康的一大威胁。在世界各地，随着耐药菌株和艾滋病病毒感染的增加，结核病仍具有较高的发病率和死亡率。结核分支杆菌感染人体之后，可以以潜伏状态存在很长时间并且在人体免疫力低下时使被感染者发展为活动性结核，因此潜伏期结核分枝杆菌的诊断和控制是人类面临的一大难题。当前结核病疫苗卡介苗(Bacilli Calmette Guérin, BCG), 在全球很多地区得到广泛应用，但相关研究证实BCG可以预防儿童结核，但对成人肺结核和潜伏感染结核无效。因此，迫切需要研究针对成人结核病和潜伏感染结核病的新型疫苗和新型疫苗免疫策略。 目的：研究用于加强BCG效应的结核亚单位疫苗，本课题选用结核分枝杆菌对数生长期Mtb10.4 (Rv0288)和休眠期保护性抗HspX (Acr, Hsp16.3, Rv2031c)，构建融合蛋白Mtb10.4-HspX(MH), 并对其免疫特性和保护效果进行评价。方法：X, 并将他们依次插入到表达载体pET-30a(+)的多克隆位点中构建重组质粒Mtb10.4-HspX-pET30a(+)，将此质粒转化入大肠杆菌BL-21(DE3)中表达。用ELISPOT技术，检测MH对人T细胞的免疫反应。将该蛋白和佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和TDM）混合构建亚单位疫苗在0、3、6周免疫C57BL/6小鼠三次，末次免疫后6周检测此疫苗的免疫原性。MH疫苗在BCG初免后12、14周加强免疫C57BL/6小鼠两次，末次免疫后6周检测其加强BCG的免疫效果；周(H37Rv毒株经尾静脉攻击免小鼠，感染后检测小鼠肺脏结核菌载量，并分析肺组织病理损伤，评价此疫苗加强BCG的保护效果。结果：MH在大肠杆菌中可溶性稳定表达，且依次经离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤层析得到；体外结核病人及结核分支杆菌潜伏感染人，γ（IFN-γ）。亚单位疫苗小鼠诱发小鼠产生IFN-γ、IL-17）和抗体（IgG1、IgG2b、IgG2c）。BCG初免MH加强组小鼠产生的细胞因子（IFN-γ、IL-17）和抗体（IgG1、IgG2b、IgG2c）明显高于BCG单独免疫组。毒株攻击后, MH加强免疫组小鼠肺脏荷菌量明显低于PBS组（P0.00）和BCG组（p=0.069），组织病理损伤较轻及且损伤面积明显小于PBS（P0.05）和BCG（p0.05）组。 结论：MH联合佐剂DDA-TDM可引发较强的抗原特异性的细胞和体液免疫应答且具有加强BCG的免疫保护效果针对活动性结核和潜伏感染感染结核的有效候选疫苗。Mtb10.4， HspX，多阶段疫苗 Construction and Evaluation of a multistage Mycobacterium Tuberculosis subunit vaccine candidate Mtb10.4-HspX Abstract Tuberculosis