多蛋白质生物界的构建及其电化学生物传感研究.pdfVIP

IIIIIlllllllIIIFII IIIIIII rllI Y2391742 摘 要 多蛋白质生物界面的研究，有助于了解生物系统中酶促反应的机理。探讨生 物界面中氧化还原蛋白质(或酶)的电子传输过程，能为了解真实生物体系的电 子传输机理提供参考以及发展高灵敏的电化学生物传感器等。多蛋白质生物界面 构建的传感器具有选择性高、操作简单、分析速度快和有望进行在线活体检测等 优点，在食品检测、环境监测以及探究生命体信息传递规律等方面均有重要应用 前景。将具备良好导电性和生物相容性的复合材料以及能很好地保持酶活性的生 物分子材料用于固载多蛋白质，以构建有利于电子转移的生物界面。本研究致力 于发展新型材料固定化技术，以改善所固定的生物蛋白质分子的活性、提高生物 传感器的性能。实验中构筑了一系列多蛋白质生物界面以揭示蛋白质问的相互作 用机理和信息传递规律，并发展性能优越的电化学生物传感器。具体的研究工作 如下： 1．(GOD／ConA)。二蛋白质多层膜界面的构建及其电化学葡萄糖传感器的 研究。利用电沉积技术在玻碳电极(GCE)表面制备金纳米粒子．壳聚糖 大的比表面积和良好的生物相容性，有利于刀豆球蛋白A(ConA)固载于修饰 电极表面上，再利用ConA与葡萄糖氧化酶(GOD)之间的凝集素．葡糖基生物 特异性结合，固载GOD分子，最后重复固载ConA和GOD制备多层膜界面。 凝集素．葡糖基生物特异性结合方式能使蛋白质GOD定向吸附在电极表面从而 可用于研究酶的直接电子传输。同时采用层层自组装(LBL)技术，可以增大 GOD的固载量。实验详细研究了GOD的直接电化学和电催化特性，并测试了检 测葡萄糖的性能指标。 C共固载于AuNPs．CHIT修饰电极上构建的新型葡萄糖传 2．基于GOD．Cyt C共固 感器的研究。首先将AuNPs．CHIT电沉积到GCE表面上，再将GOD．Cyt C能为GOD 好的生物相容性可增大C)rtc．GOD在电极上的表面覆盖度。此外，Cyt 提供一个生物相容的微环境从而很好地保持GOD的生物活性，并且有利于实现 c／AuNPs．CHIT／GCE GOD的直接电子传输。实验发现在检测葡萄糖时，GOD．Cyt 二蛋白质修饰电极比GOD／A心婵s．CHIT／GCE单蛋白质修饰电极的检测范围更 宽、检出限更低，这是因为GOD在02存在时将葡萄糖催化氧化生成葡萄糖酸 和H202，同时消耗02。而CytC能将H202歧化分解为水和02，使支持电解质 溶液中的02消耗更慢，从而使检测范围变宽。此研究为构筑性能更加优越的二 蛋白质生物界面葡萄糖传感器提供依据。 c／DNA)。多层膜的电子传输及电催化研究。利用 3．基于LBL的(HRP．Cyt C，制备二蛋 LBL技术在CytC单层膜电极上交替修饰DNA和二蛋白质HRP．Cyt 白质多层膜界面。实验研究了组装层数对界面性能、蛋白质相互作用以及电子传 输的影响。比较了二蛋白质多层膜界面与单蛋白质多层膜界面电催化性能的异 同，优化了界面的构筑条件，揭示了蛋白质界面中信息的传递规律，测试了传感 器的性能。基于此二蛋白质多层膜界面构建了高性能的H202电化学传感器。 4．以Con c．HRP三蛋白质单层膜界面的构建及H202电化学 A为载体的Cyt 传感器的制备。先制备HRP单层膜电极，接着利用HRP的葡糖基与ConA进行 特异性结合将Con C混合蛋白质于电极上。ConA能和 A固载，再组装HRP．Cyt