毛细管电泳在生样品分离分析中的应用研究.pdfVIP

DissertationforMaster OFCAPILLARY APPLICATION INTHESEPARATIONANDANALYSISOF BIOLOGICALSAMPLES Candidate：SuyanYing Supervisor：WeipingWang Discipline：AnalyticalChemistry of Science CollegeChemistryLife Normal ZhejiangUniversity,Jinhua321004，Zhejiang 毛细管电泳在生物样品分离分析中的应用研究 摘要 毛细管电泳(CE)作为一种较新的微分离技术，具有快速简便、分离效率高、 试剂消耗量少和灵敏度高等特点，广泛用于医学、环境和食品等复杂样品的分离 分析。激光诱导荧光检测(LIF)是毛细管电泳最灵敏的检测方法之一，非常适合 于复杂样品中的痕量组分分析。目前，CE．LIF常用于本身具有荧光性能或易被 荧光试剂标记和染色的物质测定，但传统的荧光探针种类少，标记时间长。量子 点作为一种新型的荧光探针，具有独特的光化学特性，如宽的激发光谱、窄的发 射谱带、不易漂白和极好的光稳定性等，在生命分析化学、生物化学、分子生物 学等领域显示出广阔的应用前景。生物样品具有样品量少、待测组分含量低、基 质复杂等特点，实现生物样品中痕量组分的快速、灵敏检测，是分析工作者面临 的巨大挑战。因此，开展生物样品中痕量组分分析方面的应用研究，建立复杂基 质中目标分子的灵敏检测方法，具有重要的意义。 该论文在综述前人工作的基础上，主要开展了以下研究工作： (1)建立了一种同时分离测定鱼血液中皮质醇、雌二醇及睾酮含量的胶束电动色 谱法。研究了缓冲溶液浓度、添加剂含量、pH、分离电压及温度对分离的影 mmol／L 响，得到了最佳分离条件。即运行缓冲溶液为12mmol／L硼砂+60 SDS+6 9．5，检测波长225nln，分离电压25 mmol／L声．CD+8％(v／v)L腈，pH kV，分离温度25。C的条件下，采用毛细管短端进样(毛细管有效长度10 cm)， 反向分离的模式，三种类固醇激素在4min内达到基线分离。且分析物在 液中类固醇激素的检测，回收率为84．60～113．30％，满足生物样品检测要求。 (2)以谷胱甘肽(6SH)为稳定剂合成了水溶性CdTeQDs，建立了一种量子点．溶 菌酶共轭物分离分析的毛细管电泳新方法。以EDC(碳二亚胺盐酸盐1和 NHS(N．羟基琥珀酰亚胺)为连接剂，将QDs与溶菌酶进行生物偶联，探讨了 偶联剂用量、缓冲溶液类型及pH对偶联效果的影响，得到了最佳偶联条件： 50mmol／L 7．4，202．8×10。jmol／LCdTe，3025 pL pL KH2P04-Na2HP04，pH NHS，40 mg／mL mg／mL p,Llmg／mL溶菌酶。在最佳毛细管 EDC，30止1．5 kV， 9．25，分离电压20 电泳分离条件(即10mmol／L硼砂，pH 温度25。C) 下，GSH．CdTe QDs及其溶茵酶共轭物能有效分离。该法可用于生物样品中