壳聚糖与丙烯腈枝共聚物的制备及固定化酶的研究.pdf

壳聚糖与丙烯瞎接技共聚物的制备及固定化酶的研究 九七级研究生：袁春桃 导师：蒋先明教授 中文摘要 壳聚糖与丙烯腈接枝共聚后所得的产物壳聚糖-g-丙烯睛，不溶于水，透气性好且无 毒，是一种颇有广阔应抖j前景的固定化酶载体，可应用于固定化木瓜蚩白酶、果胶酶、胰蛋 白酶等。由于固定化酶的独特优越性，对于啤酒、果酒等的除浊有一定的效果。壳聚糖与丙 烯睛的接枝共聚，虽有研究报道，但其工艺条件尚存在有待研究改进的地方：而将壳聚糖--g- 丙烯腈用于固定化酶及其应用于啤酒的澄清，目前还未见文献报道。本文研究内容图解如下： 固定化木瓜蛋白酶 最佳工艺条件研究 固定化术瓜蛋白酶 定化木瓜蛋白 的初步应用 对啤酒的 澄清作用 本文研究取得了以下结果： 1、引发剂体系的筛选：分别以接枝率(G％)、接枝效率(E％)、酶固定率(％)三 壳聚 个因素作为考察指标，对H!O：一NH20H·HCI，K2S208一NaHS03和cu’ 糖—-H202三种引发剂体系进行了筛选，权衡得失、利弊，最后得出K2s20I—fNaHS03 为最优的引发剂体系。用该引发剂体系引发壳聚糖与丙烯腈接枝共聚反应，不仅 接枝率(％)、接枝效率(％)、酶固定率(％)高，重现性好，而且后处理简便． 价格较ce“引发剂便宜。用K2s：O。—NaHsO，作为壳聚糖与丙烯腈接枝共聚反应的 引发剂，目前还未见文献报道。 2、采用七因素六水平(U：)的均匀设计实验法，分别以接枝效率(％)和酶固定率 (％)作为壳聚糖与丙烯睛接枝共聚反应的优化工艺条件的考核指标，筛选出了该 反应的最优工艺条件：(1)、以E％为考核指标的最优工艺条件：壳聚糖浓度(w／w) 之比，下同)，反应时间3．5h，反应温度40℃，乙酸浓度为2％。(2)、以酶固 45％，AN／chi=105， 定率(％)为考核指标的最优工艺条件：壳聚糖浓度(w／w)1 chi／K2S20s=6， 浓度为5％。在最优工艺条件下，实验结果分别为：(1、G％：195．29％，E％： 92．24％，酶固定率(％)：74．63％；(2)G％：200．79％，E％：79．19％，酶固 定率(％)：80．83％。与郑良华等人的报道相比，不仅G％、E％增大，而且反应 时间缩短了1．5h，反应温度降低了20℃。显然该工艺条件可以节约能耗，降低成 本。将均匀设计法应用于壳聚糖的接枝共聚研究，目前还未见文献报道。 3、分别用IR、SEM、x一衍射、DTA、DTG等现代物理方法，比较系统地表征了壳 聚糖--g--丙烯腈的结构。 4、应用k(34)正交实验法，研究了壳聚糖--g--丙烯腈固定木瓜蛋白酶的工艺条件， tool·L一， 得出其最佳工艺条件：PH值为8，吸附时间为12h，离子强度为(CNlc】)O．05 酶量为50mg／g载体这，与单因素实验所得结果相一致。在此条件下制得的固定化 酶的活性最高，蛋白质分解率为62．53％，如此高的话性目前还未见文献报道。 5、研究了固定化木瓜蛋白酶的性质，研究表明：固定化酶的最适PH为8，比游离酶