十个新Y染色体STR特性及复合扩增的研究.pdf

四川大学法医遗传学博士论文 戴浩双 十个新的Y染色体STR的特性 及复合扩增研究 研究生 戴浩霖 导 师 侯一平教授 法医物证教研室 四力I大学华西基础医学与法医学院 摘〔要」 目的 本课题旨在提高Y染色体的鉴别能力，为法医Y染 色体分型提供新的遗传标记。对十个新的Y染色体STR基因座进行序 列研究和单倍型分析，为等位基因的命名奠定基础，为法医学应用提 供概率计算依据。选择其中四个基因座，依托毛细管电泳激光荧光检 测平台，应用荧光标记复合扩增技术，建立一套新的Y染色体STR基 因座复合扩增体系，并按照DNA分析方法技术工作组((TheTechnology WorkingGrouponDNAAnalysisMethods,TWGDAM)的指导方案进行 法医学应用研究，以评估其在法医鉴定中的可用性。方法 选择十个 新Y-STR基因座，PCR扩增四川成都汉族103个无关男性DNA样本， PCR扩增产物使用聚丙烯酞胺凝胶电泳分离，银染法显色，以获得其群 体遗传数据。选取其中四个Y-STR基因座，用自行设计的荧光标记引 物复合扩增，毛细管电泳荧光 自动检测系统对复合扩增产物进行检测 和分型;用混合样木、不同的组织样本、不同介质上的DNA样木和常 见动物的DNA作为模板，在不同的条件下对复合扩增系统进行测试和 优化，用实际案例进行验证。 结果 在我们研究的 103个成都汉族男 性样木中，十个Y染色体STR基因座各观察到3-8个等位基因，等位 四川大学法医遗传学博士论文 戴浩霖 基因变异度从0.2099(DYS544)到0.7523(DYS552)，共检出102个 单倍型，单倍型变异度为0.9998，标准误为0.000187;在此基础上建 立了四个Y-STR基因座:DYS510,DYS520,DYS542和DYS561的复合扩 增荧光检测体系，命名为WCUMS-TETRA-Y，简称4-Y体系。法医学 应用研究结果显示，4-Y体系具有很好的男性特异性、系统重复性、组 织同一性和种属特异性;DNA模板量高达200ng也不会超载，可以良好 分型，系统检测的最低模板量为0.25ng，可以耐受2000倍女性成份的 干扰，最高可以分析1:50比例的男性混合样本，对于各种自然环境条 件下和各种现场常见附着基质上的血痕与精斑均具有良好的检测分析 能力，非常适用于法医学实际检案。在中国成都汉族群体 103个样本 中检出64个单倍型，单倍型变异度为0.97930 结论 新的十个Y-STR基因座在我们研究的103个样本中，可 以检出102种单倍型，可以为法医个人识别提供更高的个人识别概率。 四个Y-STR基因座的复合扩增荧光体系(WCUMS-TETRA-Y)具有很好的系 统重复性、种属特异性和组织同一性，对于混合样本的分析具有独到 的优势，为提高Y染色体STR的鉴别能力提供了一种新的快速、高效 及自动化的检测分析手段。 【关键词」法医学 Y染色体 短串联重复(STR) 单倍型 聚 合酶链式反应 (PCR)荧光标记引物 复合扩增 DNA分析方法 技术工作组 (TWGDAM) 四川大学法医遗传学博十论文 戴浩霖 CharacterizationoftennovelY-STRlociand theirmultiplexPCRassay Doctor HaolinDai Tutor Prof.YipingHou DepartmentofForensicGenetics SchoolofPreclinicalandFore