A-to-I NA编辑调控肿瘤相关基因的机制研究.pdf

摘要 IIIII I II II I IIIIIIII I[I Y2114298 摘要 A-to—I RNA编辑在高等真核生物转录组的多样性及调控性中扮演举足轻重 的角色。它是在腺苷酸脱氨酶ADARs作用下的RNA分子上腺苷酸脱氨转变为次黄 苷酸的过程，是重要的转录后修饰事件。由于次黄苷酸在碱基配对过程中被识别 为鸟苷酸，A-to—IRNA编辑在编辑底物上表现为核苷酸A-to-G的转变，导致遗 传信息在RNA水平发生变化。A-to-IRNA编辑最初仅在少数基因的编码区上发 现，近年来对高通量测序数据的生物信息学分析表明，这种编辑现象对转录组进 行了普遍的修饰，涉及数千种基因，且多发生于非编码的重复序列上。编码区的 A-to-I RNA编辑事件改变氨基酸密码子常导致氨基酸的变换，并可能最终影响 到蛋白质结构和功能。非编码序列上的编辑事件则可能影响RNA的稳定、剪接、 miRNAs的成熟及其与靶标相互作用的过程。 A-to-I RNA编辑与肿瘤发生的关联是近年来研究的热点，已有研究表明肿 瘤中ADARs表达失衡并伴随着A-to-IRNA编辑的失调，这种变化可能是诱导癌 基因上调或抑癌基因下调的因素之一，有待于更多的研究予以揭示。本课题正是 从研究A-to-IRNA编辑对肿瘤相关基因的调控出发，初步讨论A-to-IRNA在 肿瘤发生中的作用。 RNA 本课题对抑癌基因ARHGAP263’UTR上和癌基因6LII编码区上的A—to—I 编辑现象进行深入研究。我们对生物信息分析出的ARHGAP26和GLll上的潜在编 辑位点分别进行了验证，确定了这两例A—to-IRNA编辑事件的存在，且在人的 不同组织和细胞系上广泛发生并呈现出不同的编辑水平。我们比较正常与肿瘤间 两种基因上发生的A-to-IRNA编辑活动，发现相对于各自对应的正常组织或细 胞系，脑、肝、乳腺肿瘤中抑癌基因ARHGAP263’UTR上编辑位点的编辑水平普 遍降低，而癌基因6L11编码区位点的编辑水平在肝和乳腺癌中降低。我们通过 研究A-to-IRNA编辑对这两种基因的调控及其调控机制来解释肿瘤中其编辑水 平下调的现象。 我们发现ADARI是介导月删醐咫63’UTR位点发生A-to-I变化的主要编辑 一步在多种细胞系发现了ARHGAP26的表达量与其A—to-IRNA编辑位点的编辑水 A-to．IRNA编辑调控肿瘤相关基因的机制研究 平相关，表明A-to-IRNA编辑能够正调控月舶f酗P26的表达。在生物信息学的指 导下，我们发现ARHGAP26 的A—to—IRNA编辑活动在一定程度上会破坏miR-30b*与ARHGAP263’UTR的靶 向结合， 我们推测A-to-IRNA编辑可能通过调控miRNA的靶向结合来正向调控 月删醐P26的表达。 我们关于A-to-IRNA编辑对癌基因GLII的调控机制研究基本都是通过生物 信息学进行预测分析的。我们分析6LII编码区的编辑事件可能破坏外显子剪接 增强子并可能影响了外显子12的正常剪接，RNA编辑导致的精氨酸到谷氨酸的 氨基酸变化可能影响了GLll蛋白质的高级结构和活性。 基于以上研究，我们做出假说，肿瘤发生过程中，A-to-IRNA编辑位点的 编辑水平的降低导致了抑癌基因ARHGAP26表达量的下调，也促进了癌基因GLII 正常功能转录体的形成和蛋白活性的恢复，最终的效应可能都促进了肿瘤的发 生。本课题关注并研究了肿瘤相关基因上的编辑事件，为A-to-IRNA编辑变化 与癌症发生发展的相关性提供了新的支持，并可能为将来的癌症诊断和治疗提供 新思路。 关键词：A-to-IRNA编辑；ARHGAP26,3’UTR：GLll；编码区 H Abstract Abstract A··to·-I