A、B亚群禽白病病毒LAMP检测方法的建立及初步应用.pdf

摘要 摘 要 Leukosis Leukosis，AL)是由禽白血病病毒(AvianVirus，ALV)弓I起的以肿 禽白血病(Avian 瘤发生和免疫抑制为特征的世界范围的禽类疾病。禽白血病病毒属于反转录病毒科，n反转 录病毒属。感染鸡的禽白血病病毒可分为外源性的A、B、C、D、J亚群和内源性的E亚群。 目前，世界各国控制禽白血病的主要方法是通过病原检测，淘汰阳性鸡，从而净化种群达到 消灭本病的目的。因此，在该病的控制中及时准确的诊断就显得尤为重要。目前，基于核酸 扩增的分子生物学诊断技术如PCR、实时荧光定量PCR等在病原微生物的检测以及疾病诊 断方面发挥着重大作用，但这些方法要么需要精密仪器，要么要求操作人员具备较高的专业 知识和操作技能，因此不利于在基层推广，无法满足简单、快速、准确诊断的要求。而传染 病的防控和治疗的关键在于对病原微生物的快速、准确的检测并确诊。因此，建立一种快速、 准确的新型诊断技术迫在眉睫。 本研究根据序列对比结果和禽白血病亚群间序列特征，针对印貊区段设计了两组分别用 于检测A、B亚群禽白血病的LAMP引物。通过对反应条件的优化，使得A、B亚群的LAMP 检测方法不与除本身死群外的其它禽白血病主要亚群发生交叉反应，同时也不与其它常见的 禽类传染病发生非特异性反应。ALV-A的LAMP方法敏感性试验表明：该方法能够在45分 验表明：该方法在80min内能够检测出4000个拷贝的病毒核酸，与普通PCR敏感度相当。 LAMP检测方法的建立实现了对A、B亚群的快速检测，而且可通过添加荧光染料FDR，使 其反应前后颜色发生显著变化来进行判定，实现了反应产物的可视化。整个反应过程不需要 开盖，极大地减少了污染的可能性，具有现地应用的前景。 综上所述，本研究成功建立了A、B亚群禽白血病的LAMP检测方法。为今后的相关研 究奠定了理论基础。 关键词禽白血病；禽白血病病毒；ALv-A；ALV-B；LAMP；可视化 Abstract and of DevelopmentPreliminaryApplicationLoop- mediatedIsothermal the DetectionofAvianLeukosisVirus AandB Subgroup Abstract leukosisis inducedavianleukosis to Avian by viruses(ALV)，whichbelongsgenus withintheretroviridae itischaracterized diseasesand Alpharetrovirus family．And byneoplastic inthe worldwide．ALVbe poultryindustry Call classifiedintoseveral immunosuppressiveproblems tothevirusneutralizationinterference according test,viral test,andsequence of subgroups analysis the ALV,for envelopeprote