Geobacilus thermodenitrificans NG80-2烷烃单加氧酶LadA的分子生物学改造.pdf

摘要 摘要 石油作为人类的重要能源正在不断减少。在开发和利用石油的过程中，。环 境也不可避免的遭到了破坏。研究新的采油技术和石油污染修复技术将会很好 的解决上述问题。 Geobacillus NG80．2分离于天津大港油田。通过前期基因 thermodenitrificans 组学和蛋白质组学的研究，发现NG80．2存在一条降解长链烷烃途径，／adA是 这条途径中最重要的一个基因，它参与NG80．2降解长链烷烃的第一步反应，能 分酶，易于在Ecoli中表达和纯化。这些优良性状使得LadA在工业合成、石油 开采和石油环境污染等领域有很大的潜力。 本实验在前期实验的基础上通过定点突变、融合蛋白等分子生物学方法改 的FMN还原酶克隆(区别在于ladA和其辅酶基因的链接臂密码子不同)，对这 11个克隆进行了Ecoli中表达条件的优化，最终纯化出两个LadA改造蛋白： 造蛋白均以包涵体形式存在，需要进一步对其进行优化。构建了9个LadA突变 中的培养9个互补菌株(LadA互补菌株为参考菌株；不加碳源C】6培养基培养 的菌株为负对照)和测定生长曲线，体内验证了这9个LadA突变活性，结果表 明，这9个突变酶活性均高于野生型LadA活性。这些都为进一步研究LadA提 供了一定的理论基础，也为构建优良的工程菌株解决石油资源匮乏和石油污染 提供了研究借鉴。 关键词：Geobacillus NG80．2；降解烷烃；ladA；LadA： thermodenitrificans 烷烃羟化酶；酶分子改造 Abstract Abstract Oil for resourc2，an human，is the importantenergy gradually decreasing．In of and environmentalso processpetroleumexploitation is utilization，the inevitably new ofoil andoil destroyed．Therefore，the technologyproductionpollution isof for remediation thesolutionofthese greatimportance problems． Geobacillus in thermodenitrificansNG80—2，isolated DagangOilfield，Tianjin，is member a ofoil relatedtoalkane havebeen good microbes．Manygenes degradation identifiedinNG80-2 ofNG80—2 first