CHD4通过影人脑微血管内皮细胞增殖调控血管发生.pdf

·中文论著摘要· CHD4通过影响人脑微血管内皮细胞增殖调控血管生成 目的 血管生成是人体重要的生理过程，对血脑屏障的形成至关重要。影响人脑微 血管生成的因子很多且复杂，近年来随着表观遗传学研究的兴起，人们发现表观 遗传调控在大多数生理进程中都发挥着不可替代的重要作用，但是表观遗传调控 与血管生成的关系，尤其是一些表观遗传调节因子对人脑微血管生成的影响，目 前国际上报道还很少。 表观遗传调控的一个重要机制是染色质重塑，染色质重塑是基因表达调控过 程中一个非常重要的环节，是由ATP提供能量的、通过依赖于ATP的染色质重 塑复合物改变组蛋白与DNA的结合状念，在靠近核心组蛋白的DNA表面建立 特殊的构象，使转录因子较易于接近DNA的过程。．染色质重塑分子CHD4 (chromodomainhelicaseDNA 4)属于第三类染色质重塑酶。 bindingprotein CHD4又称Mi．2p，参与染色质重塑、转录阻遏以及DNA修复和重组等一系列 基本细胞进程。在神经系统其他各组织器官的细胞分子发育进程、免疫细胞分化、 造血干细胞谱系分化和癌变等一系列生理过程中发挥重要作用。CHD4和造血干 细胞的发育有关，由于血细胞的发育和血管系统的发育是一个在时间和空间上紧 密相连的过程，因此我们推测CHD4在血管发育中可能也发挥一定作用，因此 我们有必要探讨CHD4在血管生成中的作用。关于CHD4与血管发育的关系， 最近有报道称，从发育中的内皮细胞敲除Brgl会通过错误调节Wnt信号通路导 致卵黄囊血管畸形，而敲除凸水会引起卵黄囊血管系统中一系列Wnt靶基因表 达上调，抑制血管畸形。血管发育中，CHD4通过直接调节wnt应答转录因子 乃厂7和一组Wnt应答靶基因的表达调控内皮细胞Wnt信号通路。从血管内皮同 Wnt信号通路来介导卵黄囊血管生成。但目前国际上尚无CHD4在HBMEC血 管生成中的作用及其机制的报道。 BrainMicrovascular 本研究用RNAi方法来干扰人脑微血管内皮细胞(Human Endothelial 响。结果发现，CHD4通过影响HBMEC增殖调控血管生成，其具体分子机制尚 需进一步探讨。 我们的研究结果可为探明在人脑微血管生成进程中CHD4主导的表观遗传 调节的分子机制积累原始资料。 2 方法 1、探讨不同密度HBMEC中CHD4的表达 (1)Western blot方法检秘!gCHD4在不同密度HBMEC中表达水平 (2)免疫荧光检洪]CHD4在HBMEC中表达部位 2、探讨瞬时干扰CHD4对HBMEC血管生成的影响 (1)瞬时干扰HBMEC中CHD4表达检测干扰效率 (2)瞬时干扰CHD4后检测HBMEC血管生成 3、稳定干扰HBMEC中CHD4表达对细胞迁移能力和增殖能力的影响 (1)划痕法检测瞬时干扰CHD4对HBMEC迁移能力的影响 (2)流式检测瞬时干扰CHD4表达对HBMEC细胞周期的影响 (3)合成CHIMshRNA稳定干扰质粒 (4)CHD4shRNA稳定转染到HBMEc中，Westernblot方法检测以筛选出干扰效率高的 克隆株 (5)流式细胞仪检测稳定干扰CHD4表达对HBMEC细胞周期的影响 达的影响 Western Eph．A受体币llephfin．A配体家族成员表达。 结果 l、CHD4特异性地在细胞核表达，且表达量随细胞密度增大而增大。 (1)CHD4在较高密度HBMEC中表达水平高 (2)HBMEC中CHD4集中在细胞核表达 2、瞬时干扰CHD4在HBMEC中的表达抑制HBMEC血管生成。 (1)siRNA 2059和siI喇A2208片段对CHD4干扰效率高 3、干扰HBMEC中CHD4表达不影响细胞迁移，但影响其增殖。