J亚型禽白血病毒抗体检测方法的建立及LTR体外启动活性分析.pdf

摘要 J亚型禽白血病病毒抗体检测方法的建立及 LTR体外启动活性分析 摘要 Virus J亚群禽白血病病毒(AvianLeukosis J，ALV-J)自上个世纪发 Subgroup 现以来，以垂直和水平两种传播形式在世界各国肉种鸡及商品肉用型鸡群中广泛 流行，以诱发肿瘤、引起肉种鸡死亡和消瘦为主要特征，同时还能导致机体发生 免疫抑制，给养禽业带来巨大的经济损失。近年来，该病在我国养鸡业中呈现流 行趋势，其致瘤宿主谱系己扩展至不易发生肿瘤的商品蛋鸡。鉴于目前尚无有效 的药物或疫苗可供使用，通过淘汰ALV-J抗体阳性鸡群，减少垂直传播是当前净 化鸡群感染禽白血病的唯一手段。因此，建立AL、，-J抗体的特异性检测方法，对 防制该病流行、开展种群净化具有重要意义。本论文即利用原核表达系统高效表 达了ALV-J的囊膜糖蛋白基因，并以纯化蛋白为抗原建立了检测ALV-J抗体的 间接ELISA方法。 首先。根据AL、，-J原型株HPRSl03基因序列设计了一对引物，特异性扩增 检测(WesternBlot)结果表明，表达蛋白具有良好的免疫原性。然后，本研究 测方法，并对部分鸡场的ALV-J疑似血清样本进行了检测。结果表明，上海某种 鸡场的血清阳性率为100％、安徽某种鸡场血清阳性率为85．7％(6／7)、安徽某 鸡场十分严重。 为了探讨ALv-J在鸡群中垂直传播的分子机制，为临床防制AL、r．J感染提 供理论依据，本论文还对ALV-J基因组的长末端重复序列(LTR)的转录调控功 摘要 和R区)的重组质粒。然后转染DFl细胞，通过检测萤光素酶的表达，研究L1R 的启动子活性及其功能性区域。结果表明，LTR具有较高的启动报告基因转录的 功能，其中的U3区是LTR的启动子活性区，U5区则可能存在负调控功能，本 研究为进一步了解AL、，-J的复制调控机制和分子致病机理奠定了基础。 子 n THEESl)惦LISHM匣NTOFTHEDL～GNOSTICMETHOD FORDETECTINGANTIBODYAGAINSTAVp心i LEUKOSISⅦ之USSUBGROUPJANDFUNCTION REPEAR ANAI二ySISOFTHELONGTERMINAL ABSTRACT Sincethelatel virus becomeakind leucosis 980s，avian J(AL，V—J)has subgroup of the ofthe meat-typepoultryindustry importantdiseases，threatingdevelopment wordwide．Theeconomiclosscausedinthebroiler ALV-Jis by significant industry oftendueto of decrease mortal