LPAAT蛋白族与肿瘤转移相关性的研究.pdf

摘 要 肿瘤转移始终是肿瘤防治工作中面临的难题，只有有效控制、阻断肿瘤转移 才可能实现肿瘤的治愈。肿瘤在演进过程中，一些肿瘤细胞具有了侵袭和转移能 力，而这种转移表型的获得在很大程度上是由于肿瘤细胞内基因发生异常改变引 起的。目前，从分子水平揭示肿瘤转移的本质，研究肿瘤转移相关基因成为肿瘤 转移研究的热点。 溶血磷脂酸酰基转移酶（Lysophosphatidic acid acyltransferase，LPAAT）是 细胞内参与磷脂生成及代谢的酶类，能够催化酰基辅酶 A 上的酰基转移到溶血 磷脂酸（LPA）生成磷脂酸（PA），LPAAT 蛋白家族目前已发现有8 个成员，有 研究发现，LPAAT 在髓性白血病细胞中表达上调，而且其表达水平与白血病细 [1] 胞的异常增殖和耐药性有关 。还有研究表明LPAAT 在卵巢癌细胞中表达上调， [2,3] 并且其表达水平与肿瘤的恶性程度及预后相关 。 本实验主要以溶血磷脂酸酰基转移酶家族成员—LPAAT-theta（又称mag-1 ， metastasis associated gene -1）和LPAAT-beta 作为研究对象，通过改变mag-1 在 肿瘤细胞内的表达水平，研究实验动物体内肿瘤转移发生的变化情况，以及肿瘤 转移细胞对微环境适应能力；通过改变LPAAT-beta 在肿瘤细胞内的表达水平， 初步探讨LPAAT-beta 与肿瘤转移的相关性。为了解LPAAT 蛋白家族在肿瘤转移 过程中的功能和分子机制提供依据。 主要研究结果如下： （1） mag-1 与肿瘤转移相关性的研究 通过小鼠体内自发成瘤和转移实验确定mag-1 与肿瘤转移的关系。以shRNA 敲低 mag-1 的表达，敲低实验组小白鼠乳腺生成原发瘤的平均重量为 2.065±0.241g，而空白组与无关干涉组小鼠乳腺生成的原发瘤的平均重量分别为 3.998±0.597g 和3.268±0.638g。敲低实验组小于空白组和无关干涉组；而且敲低 实验组小白鼠肺部生成肿瘤转移灶个数平均为0.889±0.269 个，而空白组与无关 干涉组小鼠肺部生成的转移灶个数平均分别为7.182±1.146 个和9.143±1.033 个。 敲低实验组的数量明显少于空白组和无关干涉组。说明干涉mag-1 的表达不仅能 够抑制原发瘤的生长，而且还能够抑制肿瘤转移的发生发展。 （2） mag-1 对肿瘤生长与转移微环境的适应研究 增强HIF-1a 蛋白稳定性的研究。上调 mag-1 的表达能够增加肿瘤细胞内 HIF-1a 蛋白的表达；反之，下调mag-1 的表达能够减少肿瘤细胞内HIF-1a 蛋白 的表达。进一步实验证实，mag-1 过表达能够增加肿瘤细胞内HIF-1a 蛋白的稳 I 定性，延长HIF-1a 蛋白的半衰期，从而增加了肿瘤细胞内HIF-1a 蛋白的积累量。 在mag-1 对HIF-1a 下游靶基因的调控研究发现，mag-1 过表达实验组H1299 细胞中HIF-1a 基因活性为0.612±0.014，空载组H1299 细胞中HIF-1a 基因活性 为0.434±0.010；在氧气浓度为0.5%的低氧条件下，mag-1 过表达实验组H1299 细胞中HIF-1a 基因活性为1.139±0.092，空载组H1299 细胞中HIF-1a 基因活性 为0.985±0.044；而且在正常细胞（猴肾成纤维细胞cos7）内同样能够增加HIF-1a 蛋白基因的活性；同时检测HIF-1a 蛋白下游靶基因发现，mag-1 过表达上调了 VEGF、Glut-1 等基因的表达水平。说明mag-1 能够增强HIF-1a 的基因活性，激 活HIF-1a 下游靶基因的表达水平，增强了肿瘤细胞对低氧的适应能力。 （3） LPAAT 家族成员LPAAT-beta 与肿瘤转移相关性的研究。 通过检测LPAAT-beta 在多种肿瘤细胞系中的表达可知，LPAAT-beta 在多种 HELF PLA801C 肿瘤细胞系中的表达存在差异，其中在