FABP3基因奶牛乳腺上皮细胞中的功能研究.pdf

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2015-11-01 发布于贵州
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曼量置曼量曼量曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼暑量曼曼蔓量量笪-ZDZ’_7，¨曼曼曼目录中文摘要………………………………………………………………………………………I 英文摘要………………………………………………………………………………………II l弓I 言……………………………………………………………………………………………………………………l 1．1奶牛泌乳功能基因研究…………………………………………………………………l 1．2 FABP3基因的研究………………………………………………………………………l 1．2．1概述……………………………………………………………………………………………………………．1 1．2．2生物学功能…………………………………………………………………………2 1．2．3临床应用……………………………………………………………………………2 1．3乳脂合成信号通路中重要分子的研究…………………………………………………3 1．3．1SREBPl………………………………………………………………………………………………………．．3 1．：；．2PPAR丫．．．．…．……．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．：； 1．3．3长链脂肪酸…………………………………………………………………………．4 1．4研究的目的与意义……………………………………………………………………一4 2材料与方法…………………………………………………………………………………．6 2．1乳腺组织总RNA提取…………………………………………………………………6 2．1．1实验耗材和仪器……………………………………………………………………．6 2．1．2乳腺组织处理………………………………………………………………………．6 2．1．3 RNA的提取…………………………………………………………………………．6 2．1．4质量检测……………………………………………………………………………6 2．2功能基因筛选及qRT-PCR验证………………………………………………………．．6 2．2．1设计引物……………………………………………………………………………7 2．2．2 cDNA合成……………………………………………………………………………………………………7 2．2．3 qRT-PCR验证………………………………………………………………………………………………．8 2．2．4引物效果验证………………………………………………………………………．8 2．3奶牛乳腺上皮细胞培养…………………………………………………………………9 2．3．1主要试剂……………………………………………………………………………9 2．3．2实验仪器……………………………………………………………………………10 2-3．3细胞原代培养………………………………………………………………………10 2．3．4细胞传代培养及纯化鉴定……………………………………………．．…………．10 2．4 0 FABP3基因过表达……………………………………………………………………．．1 0 2．4．1引物设计及PCR扩增……………………………………………………………．．1 2．4．4重组质粒转染奶牛乳腺上皮细胞…………………………………………………12 2．4．5 3 qRT-PCR检测………………………………………………………………………………………………．1