Cdc25A抑RIG-I介导的信号通路机制研究.pdf

摘要 机制研究 |lIIIIfrillIIIIIIIIIIIIIIIHIIIIIIIf Y2577951 摘要 RIG．I介导的天然免疫反应是宿主抗病毒的重要防御机制。模式识别受体 (PI汛)RIG．1分布在细胞质中，当病毒感染宿主细胞之后，RIG．I通过其C末 端特异性地识别并结合病毒的病原相关分子模式(PANIP)，主要是带有5’-pPP 构象改变，释放出N端的CARDs结构域。活化的RIG．I和定位于线粒体外膜上 的VISA通过CARD结构域之间的相互作用结合在一起，激活VISA，活化的 体上形成一个以VISA为中心的信号复合体，磷酸化激活TBKl和IKK，最终导 表达。 RIG．I介导的信号通路在宿主的天然免疫反应中的重要地位，要求宿主细胞 必须能够对RIG．I信号通路进行严密的调控，以免造成细胞自身的损伤。目前对 RIG．I信号通路调控的研究主要集中在2个方面：①宿主细胞蛋白对RIG．I信号 通路的调控，包括正调控和负调控。TRIM25蛋白是一种E3泛素连接酶，能够 连接的泛素化，促进砒G—I与VISA的结合，正调控RIG—I信号通路。但另外一 化，导致RIG．I的泛素化降解，负调节RIG．I信号通路。此外，负调控RIG．I信 信号通路的调控。如A型流感病毒编码的非结构蛋白NSl，它可以特异性的结 合RIG．I，抑制其功能。丙型肝炎病毒HCV的NS3／4A具有蛋白酶活性，能够特 号转导的能力。 大量的研究表明，在RIG．I信号通路的调控中，蛋白的磷酸化修饰发挥着非 常重要的作用，例如我们实验室最近发现的蛋白激酶CKlyl通过磷酸化p65的 Cdc25A抑制RIG—I介导的天然免疫信号通路机制研究 源二聚体，入核，促进IFND基因转录。 但是，目前关于RIG．I信号通路蛋白去磷酸化调控的研究还不是很深入。通 过前期的荧光素酶报告基因筛选，我们发现磷酸酶Cdc25A能抑制RIG．I信号通 路。Cdc25A是一个双特异性的磷酸酶。已有的研究表明，Cdc25A与细胞周期 的调控、细胞增殖、肿瘤发生和预后不良等密切相关，但Cdc25A对天然免疫调 控的研究目前还没有文献报道。 我们的研究表明，过表达Cdc25A显著的抑制了仙台病毒SeV和A型流感 诱导的ISRE启动子的激活和p65诱导的NF．r,B启动子的激活，这也就暗示 Cdc25A可能是作用于TBKl水平负调控RIG．I信号通路，进一步的研究发现， 控可能与其磷酸酶活性有关。免疫共沉淀实验证明Cdc25A可以结合RIG．I、VISA 因此我们推测，Cdc25A可能是通过与RIG．I信号通路的蛋白发生特异性的结合， 进而影响了VISA信号复合体的组装，抑制RIG-I信号通路。同时我们发现， Cdc25A与RIG—IN端CARDs结构域的结合能力明显强于全长的RIG．I，这提示 等蛋白形成信号复合体。 复合体的组装，进而抑制TBKl的磷酸化，负调控RIG．I信号通路，同时，Cdc25A 的磷酸酶活性也可能直接作用于TBKl，抑制TBKl的磷酸化，下调RIG．I信号 通路。 关键词：天然免疫，RIG．I信号通路，VISA信号复合体，Cdc25A，去磷酸化 Abstract of Themechanism Cdc25A RIG--I phosphataseinhibiting 1● 』 l● medlatedlmmUne response Abstract TheRIG—I—like is of andLGP2． composedRIG．