microRN-200家族调控AP-2α基因表达的研究.pdf

摘要 AP．2a是转录因子AP．2家族的成员之一，通过调控细胞增殖和 凋亡过程中的多种基因起到肿瘤抑制的作用。已有研究表明：包括顺 铂在内的多种化疗药物可诱导内源性AP．2a的表达，从而促进癌细胞 凋亡、增强细胞对化疗药物的敏感性。与此相反，microRNA．200 膜癌与食道癌中高表达，而它们的过度表达与细胞对顺铂的抗性相 关。因此，本文研究miR-200家族对AP．2a基因的调控，以及与子 宫内膜癌细胞对顺铂敏感性的关系。 我们通过生物信息学软件Target 应答元件(MRE)，而且在这个应答元件中具有一个单核苷酸多态 7 们分别将AP．2a基因的野生型3’UTR、MRE缺失的3UTR以及MRE 7 都降低了MRE以及包含有MRE的野生型3UTR的荧光素酶表达， 而缺失了MRE的3’UTR的荧光素酶活性不受影响。这些结果表明 7 UTR 的MRE上。 T 为了研究miR-200家族对内源的AP．2a蛋白表达的影响，我们 染后36小时用Westernblot检测内源AP．2a的表达。结果显示在 负调控细胞内源性的AP．2a的表达。 rsl045385 为了研究SNP AC变化对miRNA结合的影响，我们 7 UTR。为了进一步证明这个结论，我们构建了两种基因型的全长 rsl045385 我们接着测试了SNP AC变化是否影响子宫内膜细 胞对顺铂的敏感性。我们将两种基因型的AP．2a表达质粒 用不同浓度的顺铂处理6小时。克隆形成实验等结果表明，转染 胞中通过抑制AP．2a的表达来降低细胞对顺铂的敏感性，且发现了 AP．2a的一个SNP位点(rsl 和miR-429与AP．2amRNA的结合，从而影响髓C．1．A细胞对顺铂 的敏感性。我们的结果表明，SNP位点rsl045385很可能是一个顺铂 治疗的预后标志。 应答元件(MRE)；顺铂 ⅡI ABSTRACT The factor a AP--2ais memberoftheAP·-2 transcription family, whichcanfunctionasatumor various suppressorbyregulatinggenes involvedincell and proliferation drugs induce includingcisplatin post—transcriptionallyendogenousAP一2a， whichcontributestochemosensitivity byenhancingtherapy—induced andmiR一429 inendomet