Notch信号LPS引发小鼠胚胎肺损伤中作用的初步研究.pdf

·中文论著摘要· Notch信号在LPS引发小鼠胚胎肺损伤中作用的初步 研究 目的 支气管肺发育不良(Bronchopulmonary dysplasia，BPD)是发生于早产儿的 一种常见慢性肺疾病。一般认为BPD的发生是与长期的机械通气和辅助用氧有 关，然而越来越多的证据表明围生期的宫内感染(Intrauterineinfection)可能在 BPD的发病中亦起着关键作用，宫内感染通过影响肺泡细胞的死亡和炎症反应 来发挥作用。 目前国外研究发现宫内感染的病原体主要是革兰阴性菌，主要致病成分是其 like 体Toll样受体4(Toll 4，TLR4)结合，通过TLR4信号转导途径， receptor 激活急性炎症反应，从而在多个环节致使宿主天然免疫系统的失衡，导致宿主肺 组织处于一个适度的炎性预敏状态和肺发育的异常，在后天的因素如机械通气、 高氧等共同作用下导致宿主肺组织炎性反应的增强并最终引起BPD的发生。 Notch信号通路由Notch受体、配体和细胞内效应分子CSL蛋白以及 Notch的调节分子等组成。在哺乳动物中共发现4类Notch基因，编码4种 Notch受体，即Notch1．4。Notch受体是一种单次跨膜蛋白，其结构在进化过程 中高度保守。Notch配体同样为单次跨膜蛋白，在哺乳动物中鉴别出至少5种配 obstructive 慢性阻塞性肺病(Chronic disease，COPD)、肺动脉高压症 pulmonary 等多种肺部疾病的病理过程，干预Notch信号有望阻抑这些疾病的发生及发展， 为其预防和治疗提供新思路。 本研究拟使用II型肺泡细胞(Mouse 12，MLEl2)和昆明小 LungEpithelial 鼠E18．5肺组织为研究对象，利用LPS来建立模型，模拟宫内感染。观察Notch 究Notch受体对II型肺泡细胞炎症反应及细胞死亡的作用，进而探讨Notch受体 在BPD发生中的可能机制，阐述Notch抑制剂在缓解炎症反应及增加存活率的 作用，为临床上治疗BPD提供方案。 方 法 1、细胞培养 2、体外培养E18．5n,切片 3、RealtimePCR 4、Western Blotting 5、WST 6、细胞免疫荧光 7、石蜡包埋及切片 8、组织免疫荧光 9、统计分析 结 果 1、肺发育过程中Notch表达变化情况 随着肺的发育进程，Notchl、2的表达呈现升高趋势。 2、LPS处理MLEl 2细胞后的生物学效应 (1)60I_tg／mlLPS处tt里24,J．时可能导致MLEl2细胞凋亡和炎症因子的大量释 LPS却不能引起此效应。 放，但是10“g／ml (2)与此同时发现60“咖l 高，但是10pg／mlLPS却不能引起此效应。 3、阻断Notch信号后，LPS处理MLEl2细胞后的生物学效应 炎症因子的大量释放。 2 4、LPS处理E18．5肺切片244时后的生物学效应 LPS处理E18．5肺切片24小时后同样能观察到炎症因子IL6及 (1)601ag／ml NF．K：b的mRNA升高。 (2)与此同时，6099／ml mRNA升高。 的升高。 和NF．1cbmRNA的升高。 结论 过程。 关键词