Ran在对虾血胞吞噬中的调节作用及酚氧化酶调控相关miRNA的筛选.pdf

摘要 摘要 吞噬作用在无脊椎动物的先天性免疫过程中起着非常重要的作用，Ran GTPase可以通过与myosin轻链蛋白的相互作用调控对虾血细胞对WSSV病毒的 吞噬过程，并防御WSSV的感染，但是关于Ran基因的表达调节还未被报道过。 GTPase的启动子，利用生物素一链霉亲和素试验 本论文克隆包含TATA盒的Ran S2细胞中，利用萤光 发现Ran启动子可与Ran蛋白相互结合，在DrosophYla 素酶报告基因分析发现RanGTPase与Ran启动子结合后，萤光素酶活性降低， 表明启动子的转录活性降低，导致Ran基因转录水平下调。本研究揭示Ran蛋白 可结合自身启动子调节自身的基因转录，这种反馈调节机制是一种新的Ran基因 转录调节机制。 由于Ran蛋白在对虾免疫吞噬中的重要作用，因此本研究以Ran蛋白为靶蛋 白，筛选免疫增强剂。采用体外测定RanGTP酶活的方法，筛选获得2个能有效 增强Ran酶活的分子，分别为白介素4和溶血卵磷脂；将白介素4和溶血卵磷脂 注射对虾后测定吞噬活性，结果表明这2种分子均可显著提高对虾血细胞吞噬活 性；血细胞吞噬活性提高使得WSSV拷贝数显著降低，进而显著降低对虾因感染 病毒导致的死亡率。本研究为对虾病害的防治提供新的免疫增强剂，也为对虾病 害的防治提供新的技术手段。 miRNA是一类长度约为20-25nt的非编码单链小分子RNA，能够对基因进行 转录后表达调控，进而参与生长发育、细胞分化、凋亡和增殖等多种生理过程。 为获得与酚氧化酶原系统(ProPO)相关的miRNA，本研究分别采用酚氧化酶(P0) 激活剂TPCK和抑制剂allythourea处理对虾，再进行miRNA测序。测序结果及 差异序列比较发现，19条miRNA在激活剂或抑制剂处理后，表现为上调或下调 表达；采用Northernblot验证了试验结果。因此，19条差异miRNA对PO的表 达可能具有调控作用，参与ProPO免疫途径。 关键词：对虾，RanGTPase，启动子，免疫增强剂，miRNA，酚氧化酶 摘要 Abstract ofinvertebrate． an roleintheinnateilnmune Phagocytosisplaysimportant it revealedthattheRanGTPaseCall the is hemocytic Recently regulate phagocytosis with the WSSVinfectioninteraction of against by myosin．However shrimp tobeaddressed．Inthis ofRan remains study，thepromoter regulationgeneexpression box．Theresults of Ran wasidentifiedwhichcontaineda TATA shrimpgene typical