农杆菌介导转GFP基因大豆的获得及抗病性的鉴定.pdf

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2015-11-01 发布于贵州
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农杆菌介导转GFP基因大豆的获得及抗病性的鉴定.pdf

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3结果与分析………………………………………………………………………………19 3．1转基因大豆的获得………………………………………………………………19 3．2转基因植株的PCR鉴定………………………………………………………一20 3．3转基因植株DNA测序…………………………………………………………．20 4讨论…………………………………………………………………………………………………………………．．2l 第四章转GAFP基因To代植株抗病性及生理指标测定……………………………………23 1抗病性鉴定………………………………………………………………………………23 1．1实验材料…………………………………………………………………………23 1．2实验方法…………………………………………………………………………23 1．2．1培养基制备………………………………………………………………．23 1．2．2菌核灭菌…………………………………………………………………．23 1．2．3菌丝培养…………………………………………………………………．23 1．2．4菌核病苗期离体叶片接种方法…………………………………………．24 1_3结果与分析………………………………………………………………………．24 1．4讨论…………………………………………………………………………………………………………25 2转基因大豆To代植株的生理指标测定………………………………………………．26 2．1实验材料…………………………………………………………………………26 2．2实验方法…………………………………………………………………………26 2．2．1菌核病茎杆接种实验方法………………………………………………．26 2．2．3过氧化物酶(POD)含量测定方法(愈创木酚法)…………………………27 2．3结果与分析………………………………………………………………………29 2．4讨论…………………………………………………………………………………………………………29 第五章蛭石培养的农杆菌介导大豆转化方法的建立………………………………………．31 1．1实验材料…………………………………………………………………………31 1．2实验方法…………………………………………………………………………3l 1．2．1大肠杆菌感受态的制备和转化…………………………………………．31 1．2．2质粒DNA的提取………………………………………………………．．32 1．2．4酶切反应体系……………………………………………………………．32 1．2．5连接反应体系……………………………………………………………．33 1_3实验结果…………………………………………………………………………33 1．3．2设计含酶切位点引物……………………………………………………．34 1．3．3制备含酶切位点的SG3载体……………………………………………．34 1．3．4 SG3片段连结启动子和终止子……………………………………………35 1．3．5 SG3连结载体pc3301……………………………………………………一36 1．3．6 2利用蛭石培养的农杆菌介导大豆转化…………………………………………………37 2．1实验材料…………………………………………………………………………37 2．2实验方法…………………………………………………………………………38 2．3结果及分析………………………………………………………………………38 2．3．1蛭石培养法获得大豆再生植株…………………………………………．38 2．3．2获得再生植株的PCR阳性鉴定…………………………………………39 2．4讨{仑………………