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四种重要养殖贝类有效繁殖群体数量研究 四种重要养殖贝类有效繁殖群体数量研究 摘 要 我国是海水养殖大国，海洋贝类的养殖是其中重要的组成部分。对于养殖 群体来说，较低的有效群体大小(或有效繁殖群体大小)会使得群体的遗传多 样性降低，增加近交和遗传漂变的比率，特别在贝类等高产卵能力的生物中， 使用较少的亲本即可以获得足够的苗种，育苗所用的有效繁殖群体数量对养殖 群体的遗传结构具有重要影响。本研究以分子遗传学理论为基础，在贝类中进 行遗传标记的开发并检测了他们在家系鉴定中的效率。此外，应用分子家系鉴 定的方法，调查了北方沿海四种具有不同生活方式的重要经济贝类：太平洋牡 蛎(固着型)，海湾扇贝(雌雄同体底栖型)，虾夷扇贝(雌雄异体底栖型)，魁 蚶(埋栖型)等在常规苗种繁育过程中有效繁殖群体的大小、遗传多样性的变 化以及近交程度，旨在为我国海水养殖贝类遗传多样性保护和健康苗种培育提 供指导依据。主要研究结果如下： 1．海湾扇贝EST-SSR标记分离及特性分析 利用公共数据库资源，在海湾扇贝EST数据库中查找包含微卫星的序列， 开发了15个EST-SSR分子标记，采用群体多态性分析结果显示，位点的等位 位点显著偏离哈迪一温伯格平衡。在各位点之间未发现有连锁现象。5个多态性 最高的微卫星位点在已知单亲时的累积排除概率超过99％。利用筛选出的15 对引物在栉孔扇贝、虾夷扇贝和长肋日月贝中进行PCR扩增，其中9对引物在 栉孔扇贝和虾夷扇贝中能扩增出产物，有5对引物扩出的微卫星标记望多态。 在长肋日月贝中有3对引物有扩增产物，有l对引物扩出的微卫星标记旱多态。 2．海湾扇贝EST-SNP标记分离及特性分析 。 婴登重量菱堕墨耋壹塾茎堕壁堡墼重丛茎 ARMS．PCR引物设计和优化，17组引物扩增产生与预期片段长度 tetra-primer 相符的多态性位点，多态性位点最小等位基因频率从0．016到0．484。对含有 所在序列外均有匹配的功能序列，其中11个已验证SNPs定位于编码区(外显 子区)，导致同义氨基酸替换。家系模拟鉴定结果表明，SNP标记对鉴定所用亲 本的数量比微卫星标记更为敏感，因此需要更多的SNPs来抵消多态性低带来 的负面效果以达到较高并且稳定性较好的鉴定成功率。通过对海湾扇贝EST数 据库的分析构建了最优密码子使用表，以解释某一特定SNP不同等位基因频率 上的差异，分析发现对密码子使用的选择性可能会影响编码区SNP不同等位基 因的频率。这些对于海湾扇贝SNP的初步研究是对现有遗传标记的有用补充。 3．基于微卫星家系分析的海湾扇贝交配系统和繁殖成功研究 运用微卫星家系鉴定的方法对群体产卵海湾扇贝的交配系统进行了研究。 对14个候选亲本和237个子代的鉴定结果表明，采用6个多态微卫星位点能够 将95％的子代鉴定到亲本。根据家系鉴定结果，发现既有通过自体受精产生的 子代也有通过非自体受精产生的子代，但是自体受精率在亲本个体间巨大的变 异表明海湾扇贝具有混合交配模式。繁殖成功的变异造成了有效繁殖亲本数量 的降低(NdN=0．71)。群体的自体受精率为32．89％，近交系数为16．5％。在不 考虑自交子代的情况下，半同胞和非同胞亲本在亲缘关系和繁殖成功之间没有 显著的相关关系，表明可能是选择的压力而不是对近交的避免机制支持着海湾 扇贝自交兼容性交配系统的进化和维持。本研究结果使我们对目前我国海湾扇 贝的养殖状况有了深入了解，并且为以后对其进行繁殖技术改良提供了知识基 础。 4．太平洋牡蛎EST-SSR多重PCR的开发及其在家系鉴定中的检验 PCRs， 我们从以往报道的太平洋牡蛎EST-SSRs中开发出了4组multiplex 并在12组单对交配家系中检验了其在家系鉴定中的效率。位点的基因丰富度和 PCRs在家系鉴定中的 多态信息含量平均值分别为11．1和0．8ll，4组multiplex 累积排除能力大于99．99％。对143组分离模式的分析发现，有11个基因型分 婴登重蔓菱堕墨耋查墼鍪堕壁竺塑量婴塞 离比偏离孟德尔分离定律。通过分析位点在家系内的Mendelian分离模式，