家蚕发育相关基Bmvlg和Bmvis的研究.pdf

家蚕发育相关基因nmvlg和跏协的研究 中文摘要 中文摘要 cells，PGCs)是一种来源于胚胎原始生殖嵴并 原生殖细胞(primordialgerm 具有多向分化潜能的干细胞，是二倍体生物生殖细胞的前体，只短暂的存在于胚 胎中，最终分化发育为生殖细胞。对于原生殖细胞的深入研究，对于体外胚胎发 育研究、基因研究、基因组学研究、药物筛选等具有重要意义。YGSQ基因最早在果 蝇中发现，它对极颗粒的形成和生殖细胞的发育起着至关重要的作用，已有研究 表明，麟口基因突变的个体将不能生成生殖细胞。在绝大多数物种中，YGsa基因高 度保守，且仅限在生殖细胞中特异性表达，因此它可以作为一种分子标记用于研 究配子发生及原生殖细胞的起源、迁移、分化等。 为了进一步研究家蚕生殖发育的机制，我们对家蚕vasa—like gene基因(Bombyx morivasa-like Bmvlg和DsRed的融合表达转基因载体，通过精子介导法获得了转基因家蚕，荧 光显微镜观察可检测到明显的荧光蚕，表明转基因家蚕构建成功，同时在家蚕的 未受精卵中可观测到绿色荧光和红色荧光，表明Bmvlg是一种母源性基因。将 coli中成功表达了BmVLG， Bmvlg基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)中，在E 并利用镍离子柱纯化的重组蛋白免疫小鼠制备了多克隆抗体；利用该抗血清的 western kDa特 blotting分析结果显示，在家蚕精巢和卵巢中检测到了大小约为70 异性条带；免疫荧光细胞定位结果显示，BmVLG蛋白主要在BmN培养细胞中的 表达，且无明显差异。这些结果为进一步研究BmVLG的功能奠定了基础。 能够存活，但是雄性果蝇表现出不育的表型，已有研究表明Vis是一种减数分裂阻 滞基因。在家蚕中通过RT-PCR克隆了长度为847 bp的1，括基因(Bmvis)片段， 并对其进行了结构分析和进化树分析；在家蚕各种组织中的表达检测显示，Bmvis 基因仅在家蚕的精巢中表达；亚细胞定位分析显示BmVis蛋白在细胞核和细胞质 中均匀表达，但主要分布在细胞核中。研究结果为深入了解家蚕中BmVis的功能 奠定了基础。 关键词：家蚕；细胞定位；q-PCR；转基因；红色荧光蛋白 作 者：张瑶瑶 指导教师：曹广力贡成良薛仁宇 Studiesonthe Reproductive in andBmvis Gene Silkworm， Bmvlg Abstract stemcells from crest Primordial primitivegerm cells(PGCs)areoriginating germ in cells．Whichexists withthe to differentiated only of