小鼠锌指蛋白ZFD生物学功能初探及ZBTB9克隆表达.pdf

小鼠锌指蛋白ZNFD生物学功能初探及ZBTB9克隆表达 中文摘要 中文摘要 C2H2型锌指蛋白是锌指蛋白家族重要的成员，作为转录因子，广泛的参与 基因的转录调控，细胞增殖、分化及凋亡等生命活动。本实验室通过RT-PCR 从小鼠组织获得2个小鼠基因ZNFD(NM mM 功能研究尚未有报道，因此，本实验室对这2个基因展开了初步的研究。 果验证了ZNFD序列的准确性。利用生物信息学的方法对ZNFD的基因和蛋白进 进行组织表达谱分析证实ZNFD在小鼠的睾丸中特异性表达，且表达量较高。时 种问的同源性分析表明，ZNFD在不同物种间的同源性很高。 通过构建绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP．ZNFD对其进行亚细胞定位分 析，结果显示ZNFD定位于细胞核。为鉴定ZNFD蛋白N端结构域和锌指结构域 对其细胞核定位的影响，构建了一系列截短型ZNFD与绿色荧光蛋白融合表达的 重组质粒进行亚定位分析，结果显示ZNFD蛋白N端氨基酸(1．214)对其细胞核定 位是必需的，而锌指结构域对ZNFD的细胞核定位不起关键性作用。 HSE所介导的信号通路具有明显激活作用，且该激活作用具有剂量依赖性。进一 件的转录激活作用需要保持其结构的完整性。priSE．Lue质粒含有HSE元件，该质 粒专门用来检测热休克因子(HSF)I拘激活以及热休克蛋白介导的信号通路的转录 调控。HSE元件通常存在于热休克蛋白基因的启动子区，转录因子通过结合到HSE 中文摘要 小鼠锌指蛋白ZNFi)生物学功能初探及ZBTB9克隆表达 元件上进而启动下游热休克蛋白基因的表达。本文研究表明ZNFD可能作为热休 克蛋白介导的信号通路中的转录激活因子从而调控细胞的一系列生物学功能。 编码459个氨基酸。起始密码子为ATG，终止密码子为TGA。该基因所编码蛋白 7号 点状分布。通过构建ZBTB9原核表达载体，在原核表达系统中诱导其融合蛋白的 表达，并对蛋白进行纯化，得到了纯化的融合蛋白，为进一步多克隆抗体的制备 提供了原材料。 关键词：锌指蛋白；ZNFD：HSE；转录激活；ZBTB9 作 者 徐风芹 指导老师 许维岸教授 Initial of ZNFD exploration functionsand biological ZBTB9 and of cloning expression mousezinc fingerprotein Abstract The zinc c2H2。type ringer thatfuncti。n proteins as fact。rs transcripti。n perf0肋 r01es imp。nantinvari。uscellular