家蝇Rabll因鉴定及与免疫功能相关性的研究.pdf

Classified IndeX： CODE： 1O75 U.D.C.： NO.： 2OO91O81 A Dissertation for the Degree of M. Science Identification and Immune Response Analysis of Rab11 from Musca domestica Candidate： Zhang Bo Supervisor： Associate prof. Wu Chen Prof. Liu Fen -Song； Academic Degree Applied for： Master of Science Specialty： Cell Biology University： Hebei University Date of Oral EXamination： May， 2O12 摘 要 摘 要 Rabll 蛋白是一种小 GTP 酶，定位高尔基体反面网状结构、胞质中的囊泡以及感杆 基底等膜系统中，与 GTP 的结合和水解过程相偶联，在囊泡的出芽、转运、粘附、锚 定和融合几个阶段起着重要的作用 。作为能够传播多种疾病的病媒昆虫 ，家蝇 Musca domestica 常常生活在病原菌滋生的恶劣环境中 ，具有很强的适应能力 。研究家蝇独特 的免疫调控机制，将为 了解昆虫生理、免疫以及杀虫等方面提供新的思路。 本论文以家蝇为研究对象，研究内容主要分为 6 个部分 。 1. 通过转录组数据分析 、RT-PCR 及 RACE 技术从家蝇幼虫体内克隆获得类似 Rabll 基因的 cDNA 序列，经过同源分析，将其命名为 MdRabll ，并对其氨基酸序列进 行了分析 。Rabll 基因 cDNA 全长 1220 bp，包含一个 645 bp 的完整开放阅读框 （ORF ）， 根据 ORF 推导的 Rabll 肽由 214 个氨基酸残基组成，经 SignalP 程序预测此多肽不含有 信号肽 ，理论分于质量为 24.29 kD ，等电点为 5.52 。同源性分析表明，与黑腹果蝇 Drosophila melanogaster 的 Rabll 相似性最高 （identity＝97％ ） 2. 通过同源克隆得到家蝇 -actin 基因，检测了 -actin 基因作为分于内标的可靠性 。 家蝇 -actin 基因 cDNA 序列全长 1380 bp，包含一个长度为 1056 bp 的开放阅读框，编 码 352 个氨基酸，经 SignalP 程序预测此多肽不含有信号肽，理论分于质量为 39.53 kD， 等电点为 5.47 。该序列与许多物种的序列一致性均高于 94％ 。 -actin 表达量检测结果显 示热激后不同恢复时间其表达量无明显变化 ，且与未经热激处理的对照相比无显著差 异，可以作为研究受外界环境胁迫作用下昆虫体内不同基因表达水平高低的可靠内部参 照标准 。 3. 以家蝇管家基因 -actin 及 GAPDH 作为内参分于，利用实时定量 RT-qPCR 对经 大肠杆菌 （Escherichia coli ）和金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus aure