大豆氮素高效利候选基因的挖掘与克隆.pdf

摘要 摘 要 Use 培育氮素利用效率(NitrogenEfficiency，NUE)高的转基因农作物品种 对于农业的可持续发展具有极为重要的意义。本论文的研究目的是，挖掘并克 隆能够提高大豆NUE的潜在基因。首先，我们建立了一个可以以不同氮素水平 培养大豆幼苗的水培系统，测定了该系统下大豆初生叶的光合速率、叶绿素含 量、可溶性糖含量、总蛋白含量及总氮含量等生理指标。提取了该系统下氮胁 迫培养1天和3天的大豆初生叶及根中的RNA，做了大豆全基因组的表达谱芯 片。根据基因的功能或在氮胁迫下的表达变化，挑选了20个感兴趣的基因；检 测了这些基因在不同组织器官中的表达水平，并验证了它们在氮胁迫下的表达 变化。随后，挑选了结瘤因子21同源基因、双向氨基酸转运因子、铁蛋白、氨 基酸透性酶及硝酸盐转运因子等15个功能基因作为NUE候选基因。完成了这 些基因在CaMV-35S启动子驱动下的植物过表达构建，并将3个基因通过花苞浸 泡法转化野生型拟南芥。 关键词： 大豆，氮素利用效率，氮胁迫，转录谱变化，克隆构建 Abstract Abstract of with use of Developmenttransgeniccrops improvednitrog(mefficiency(NUE)is for great sustainable this tomine importance agriculture．In study,’【aimedpotential NUE from establisheda genes max)．I soybearl(Glycinefirstly hydroponicgrowth inwhich were withdifferentconcentrationsof system soybearlseedlingssupplied determinedthe of Nitrogen，then changes photosynthesisrate，chlorophyllcontent， soluble total in leaves WSC(water carbohydrates)，totalprotein，andnitrogenprimary of wasextractedfrom leaves soybeanseedlings．RNA primary androotsof and3 for nitrogen-limited(1day days，separately)seedlingSmicroarrayhybridization． Basedonthe selected 20 verifiedtheir results，I microarray approximatelygenes，and levelsindifferent wellas under expression ti