大针茅干旱胁迫qRT-PCR内参基因的筛选及PIP2s基因的表达分析.pdf

摘 要 P．Smirn)是亚洲中部特有的典型草原种，对大 大针茅(Stipagrandis 针茅的实生苗经干旱胁迫处理后，进行了如下研究： 根据已公布的内参基因序列设计引物，利用qR卜PcR方法，从肌动蛋白基因 (Act2)、微管蛋白a基因(TUBa)、微管蛋白b基因(死移西)、18S核糖体RNA基 RNA聚合酶II基因(RhAPOLⅣ)、腺嘌呤磷酸核糖转化酶基因(脚、翻译因子 基因(7zn 法综合比较各个候选基因的稳定值，筛选出在干旱胁迫下大针茅根部表达最稳定的 内参基因是18SrRNA，其次是点卜妇和TLF,最不稳定的内参基因为RNAPO吧儿 其中最稳定的内参基因组合为18SrRNA和点卜，a。在叶片中表达稳定的内参基因顺 参基因组合为J舔rRIVA和7ZR 根据已经克隆的大针茅眺J和PIP2；2基因保守区序列设计简并引物，利 用qRT-PCR方法对大针茅水孔蛋白基因户y踢』和PIP2；2的表达进行研究，结果 表明：在干旱胁迫下大针茅的PIP2；1和PIP2：2基因在根部的表达量均远远高于 叶片的表达量，并且随着干旱胁迫强度的增加这两个基因的表达量都不同程度的上 调，其中PIP2；1基因在干旱胁迫20d时表达量达到最高，约为对照的2．2倍，之 后又有所下降；而PIP2；2在干旱胁迫15d时就已经达到了最大表达量，约为对照 的2．5倍，之后表达量开始下降。说明PIP2；1和PIP2；2基因参与了大针茅的水 分运输生理过程。 关键词：大针茅；干旱胁迫；内参基因；册2jJ和御2j2基因：实时荧光定量PER of SelectionReferenceGeneof in under grandis Stipa qRT-PCR stressand of ofPIP2sGene Drought AnalysisExpression Abstract isa inCentralAsia．Withthe stress samgrandistypicalgrasslandspecies drought treatmentto in asfollows： samgrandisseedlingsgreenhouse，the study tothe ofninecandidatereference Accordingpublishedsequences genes：thesam associated associated grandisactin似ct2)，microtubulea(TUB—a)，microtubule protein ribosomal proteinB(TUB一6)，18SRNA(』鼯rRNA)，glyceraldehyde一3phosphate II dehydrogenase(GAPDH)，eukaryoticelongationfactor(EF-1a)，RNApolymerase factor C础啊POL刀)，adeninephosphoribosylconvertingenzyme卅