普通野生稻miNA的鉴定与分析.pdfVIP

摘 要 Griff．)是栽培稻的近缘祖先，是改良栽培稻的重要种质资源。为了揭示普通野生 (Or弘arufipogon 序技术对海南万宁普通野生稻小RNA文库进行了分离、鉴定及表达分析，对本项研究中发现的 只在普通野生稻中出现的miRNA构建植物表达载体，转化水稻品种日本晴，为普通野生稻中 miRNA的功能分析奠定基础。主要研究结果如下； 1．小RNA文库高通量测序数据分析 利用Illumina高通量测序平台，分析了普通野生稻小RNA文库，共得到高质量序列 mLRl66，不同于水稻高通量测序的保守miRNA家族的前四位：miR169，miR156，miR168，miR 对应的水稻基因组序列能形成发卡环二级结构，进一步通过是否有互补链miRNA*存在及二级结 新的miRNA有17个靶基因。 2．候选新miRNA的实验鉴定 提取普通野生稻小分子量RNA，利用改进的茎环引物反转录PCR进一步对能形成发卡环二 级结构的353个预测的小RNA序列进行了表达分析，结果发现除了确定的有互补链miRNA*存 在23个新的miRNA，还有32个序列通过茎环引物反转录之后PCR扩增，连接到克隆载体，测 序得到了目的序列片段，说明这32个序列在普通野生稻中有表达，可能也是新的miRNA。对这 32个可能的新miKNA进行靶基因预测，23个预测到了靶基因序列。 3．新miRNA的表达分析及转化栽培稻日本晴 的在不同部位表达有差异。将23个新的miRNA构建过表达载体，通过农杆菌介导法转化栽培稻 日本晴，得到了抗性愈伤，为进一步功能分析打下了基础。 关键词：MicroRNA，普通野生稻，栽培稻 Abstract aclassof RNAsinvolvedin controlof MicroRNA(miRNA)arenon-coding post-transcriptional wildrice via ortranslationalinhibitionof mRNAs．Common geneexpression，eitherdegradation target to L． consideredbetheancestorofAsiancultivatedrice (Oryza species，咖sativa rufipogonGriff．)is Anditisalsoa for ricemodification．Inordertorevealthevariationof cultivated importantgermplasm miRNAthedomesticationofcultivatedrice commonwiIdrice during and，hopefully，clone specific useIllumina to anddo of miRNA,we ch刮阳c抚：rize．identifyexpression sequencingapproach analysis sRNAcDNA vector ofmiRNAwhichwerefoundtobe library．Over express