核磷蛋白1在小早期妊娠子宫中的表达与调节.pdfVIP

摘要 摘要 胚胎着床是一个复杂的生理过程，包括活化的胚胎黏附到处于接受态的子宫 腔上皮，胚胎滋养层细胞侵入子宫基质细胞，以及基质细胞发生蜕膜化等一系列 生理反应。核磷蛋白1(Npml)是细胞核仁区的主要磷酸化蛋白，具有分子伴侣 功能，能穿梭于核质间，参与核糖体的合成和中心体的复制，通过多种途径调控 细胞增殖与凋亡。本实验利用原位杂交、Real-timePER、Westernblot、流式 细胞术和荧光素酶分析等方法，对Npml在小鼠早妊娠子宫中的表达、调节及功 能进行深入研究。小鼠早期妊娠第2天，在子宫腔上皮和腺上皮开始出现较弱的 NpmlmRNA信号。第3-4天时在基质细胞出现较强NpmlmRNA信号，至第5天时 PCR mRNA信号变弱。Real-time NpmlmRNA在着床点信号最强，到第6—8天时Npml 定量分析结果也与上述原位杂交结果基本一致。在卵巢切除的小鼠子宫中，孕酮 mRNA和蛋白的表达，使用孕酮受体拮抗剂(RU486)可以抑制 处理可上调Npml 孕酮对Npml的上调作用。对体外培养的小鼠子宫基质细胞进行孕酮和RU486的 处理，也得到与体内一致的结果。上述结果说明孕酮可以通过其核受体PR诱导 Npml的表达。此外，在体外培养的小鼠子宫基质细胞中过表达Npml可使细胞增 殖活性和有丝分裂能力明显增强。用Npml活性抑制剂NSC348884处理基质细胞， 可使细胞增殖能力显著下降。给妊娠第5天小鼠注射NSC348884可明显减轻着床 点的子宫重量。这些结果说明，Npml在胚胎着床的细胞增殖过程中发挥重要作 mRNA和蛋白表达明显下调，同时cAMP反 用。在体外诱导蜕膜化过程中，Npml 著升高。单独用cAMP处理子宫基质细胞，可下调NpmlmRNA和蛋白的表达。通 过预测分析，在Npml基因的启动子序列上存在CREB结合序列，并进一步证实 宫蜕膜区基质细胞的多倍体率显著上升，说明Npml能抑制细胞的多倍体性，维 持基因组稳定。总之，Npml在胚胎着床和蜕膜化过程中可能发挥重要作用。孕 酮可诱导基质细胞大量表达Npml并促进细胞增殖。 关键词：胚胎着床；蜕膜化；Npml Abstract Abstract Successful ontheestablishment depends of pregnancy embryoimplantation． isa and witll involvesactivated Embryoimplantationcomplexphysiologicalprocess attachmenttothe of invasioninto epitheliumreceptive blastocyst uterus，trophoblast uterinestromal anddecidualizationofstromal cells，and cellsaround proliferation themain