涡虫头部再生过中眼点形态发生及相关基因的表达分析.pdf

摘要 本文利用整体原位杂交技术、实时荧光定量PCR技术(Real．timePCR)、RACE技 术、石蜡切片技术和生物信息学技术等，对同本三角涡虫和阳城多目涡虫再生过程中眼 点的形态发生及相关基因的实时和原位表达情况进行了系统研究，结果如下： 下，日本三角涡虫在切割后第4天能够看至III点，第5天形成小的视杯，第15．16天左 右眼点发育完成；在最适温度14C恒温培养条件下，阳城多目涡虫在切割后第7天能够 明显看到新生芽基，第14．15天隐约观察到眼点，第20．27天眼点数目增加较快。 2．通过Real．time 涡虫头部再生过程中的表达水平和稳定性进行了研究，发现ACTB的原始Ct值变异系 中，ACTB为首选内参基因。 基酸序列和Pfl-actin基因的核苷酸序列用邻接法构建了系统进化树；同时利用整体原位 杂交技术和Real．timePCR技术研究了Psix-I基因在阳城多目涡虫成体及再生个体中的时 空表达模式。研究发现：Djopsflq基因的动态表达趋势与眼点形态发生的过程以及眼点避 光反应的恢复趋势相对应，提出Djopsin基因与眼点的避光反应等功能恢复密切相关；原 位杂交结果表明：阳成多目涡虫成体Ps／x-1基因的阳性信号主要出现在头部，眼点部位 PCR结果 呈强阳性信号，而再生个体的杂交信号在新生芽基的基部表达最强；Real．time 是促进涡虫眼点前体细胞的分化，并对眼点的形成及维持起着重要作用。结#DjJix-1基 因在R本三角涡虫中动态表达分析，指l出Six-1是涡虫眼点发育的关键性和标志性基因， 在涡虫眼点整个发育过程中起着重要作用。 4．利用Real．time 的基因网络进行了全面分析。在同样实验条件下，对同一物种九个眼点再生相关基因 达情况进行了系统研究，根据它们在眼点再生不同时期的表达差异以及表达趋势将其分 络协同作用的过程，同一基因在眼点再生的不同阶段可能执ljf亍着不同的功能，不同基因 的功能可能是不同的，也可能是协同作用的。涡虫眼点再生相关基因的实时表达与眼点 形态发生之间存在一定的对应关系。 关键词：涡虫，眼点，再生，实时荧光定量PCR，整体原位杂交 II ABSTRACT The andthe eyespots of of inthe morphogenesistranscriptsexpression transcriptseye-relatedgenes and were inthis genusDugesia studied whole-mountin Polycelisduringeyespotsregeneration paperusing situ Real—time sectionsand hybridization，quantitativePCR,RACE technique，paraffm resultswereasfollow： of intwo andP 1．Investigationeyesmorphogenesis speciesD．japonica showedthatthe of were first aboutat4 after eyes appeared semilunar