水稻白叶枯病候抗性基因的RGAs克隆及分析.pdfVIP

水稻白叶枯病候选抗性基因的RGAs克隆及分析 摘 要 作为世界主要粮食作物之一，水稻对解决人类粮食安全问题有重要意义。白 叶枯病是仅次于稻瘟病的水稻第2大病害，会造成水稻大量减产甚至绝收。化学 防治虽然一定程度上能减轻病害，但其成本相对较高，容易引起病原物抗药性， 并且对环境造成长期污染。与之相比，培育抗性品种无疑是一种更为经济、有效 和安全的方式。 疣粒野生稻中存在众多未知抗病基因，它在整个生育期对白叶枯病都表现高 抗，甚至免疫。本研究利用抗病基因同源序列(resistance geneanalogs，RGAs) 法，根据NBS类R基因的保守区核苷酸序列设计简并引物，从白叶枯病感病轮 回亲本栽培稻8411及其与疣粒野生稻进行体细胞杂交后得到的稳定高抗白叶枯 病新种质SH5、SH76基因组中克隆到3个520 bp左右的NBS抗病基因同源序 列，以此为探针从水稻基因组中筛选到2个推测的NBS—LRR抗病同源基因，暂 行了研究，结论如下： 1．克隆获得的NL-SH76基因组序列与预测基因有99％的同源性，位于水稻 ll号染色体BAC克隆B1l12E06上，使用10余对引物对NL．SH76cDNA预测 编码区进行扩增，多次测序均未发现预期目的片段，其是否为编码区序列，尚需 进一步实验。 2．克隆获得的NL．8411a基因组序列与预测基因有96．1％的同源性，位于水 RT-PCR技术从水稻SH5和SH76 cDNA中扩增出NL．8411a基因的完整编码区， 该编码区序列长度为3105 bp，编码1034个氨基酸，氨基酸序列分析显示其具备 CC-NBS．LRR类植物抗病基因的结构特征。 3．半定量RT-PCR分析表明，在取样时间范围内，NL．8411a的表达在抗、 感品种中存在显著差异，且受到水稻白叶枯病菌Zhel73的诱导。 其NBS保守区序列与番茄何基因最为接近，P矿基因对与水稻白叶枯菌来源相 似的假单胞菌属丁香假单胞杆菌番茄致病菌变种有相关抗性。并发现NL．8411a 在水稻品种日本晴中的等位基因为单拷贝。 5．对NL一8411a基因电子定位发现其处于水稻ll号染色体物理图谱的长臂 末端，但与11号染色体上已定位或克隆的8个白叶枯病抗病基因均具有不同序 列或处于不同的染色体位置。 本研究以水稻白叶枯病抗性种质为材料，以非抗性亲本为对照，增强了所克 隆RGAs的抗病针对性，结合生物信息学分析和RT-PCR技术克隆到一个与水稻 白叶枯病抗性相关的候选基因NL一8411a，为后续研究奠定基础。 关键词：RGAs法；水稻；白叶枯病抗性基因；克隆；表达分析 RGASCLONINGANDANALYSISOFACANDIDA，TE RESISTANCEGENEToRICEBACTERIALBLIGHT ABSTRACT oneofthe food inthe satire important world．Bacterial Rice(OryzaL．)is crops cause lossofrice andevenleadtolose blight(BB)Callgreat yield production chemicalscarlcontrolthediseasetosome costis completely．Although extent，the alsoinduce tohaveresistanceandcause relativelyhigh．Chemicals pathogen