棉花黄萎病菌诱陆地棉和野生棉差异表达分析及抗病相关基因克隆.pdf

Illl l III 11111111111111 mIII 92 Y21161 摘 要 黄萎病是棉花的主要病害，严重影响棉花产量和品质。抗病育种无疑是防治黄萎病 最经济、最环保和最有效的手段，但由于对棉花抗病机理认识不清，加上现有栽培品种 中抗源缺乏，棉花抗黄萎病育种一直难以突破。深入研究棉花抗黄萎病机理、克隆抗病 基因仍是目前努力的方向。本研究从接菌诱导入手，采用SSH技术从转录组水平探讨 了陆地棉基因的差异表达；采用2-DE技术从蛋白质组水平探讨了栽培棉近缘野生种瑟 伯氏棉的蛋白差异表达，并以此为基础克隆了7个抗病相关基因。 (1)以中等致病性棉花黄萎病菌W菌系接种诱导我国棉花抗黄萎病标准品种豫棉 2l号， 169 构建了正反两个SSH文库，富集筛选到抗病相关的早期诱导表达Unigene 聚类分析，共解析了152个基因；另外16个基因为未能注释，可能代表了新发现基因。 结果表明：①这些基因分属18种生物学过程、8种细胞组份和5种分子功能，集中于 19种生物学功能和53个代谢路径，说明陆地棉响应黄萎病菌胁迫，是多种类型不同功 能基因通过多种代谢和过程，通过上调和下调表达协同作用，以达到抗耐目的；②差异 表达基因主要参与代谢、细胞过程、对刺激的反应和生物过程调控，分别占基因总数的 份看，涉及细胞或细胞结构最多占65．4％，其次是细胞器和细胞器结构占28．O％，然后 是大分子复合体及内膜内壁，分别占3．9％和1．9％：从分子功能看，最多的是催化活性 和结合活性，分别占50％、42．5％，其它如分子转导、运输和受体活性占7．5％。从生 物学功能看，除了通用功能预测占13．2％外，信号转导、翻译和翻译后修饰与蛋白折叠 互作最多，各占11．4％。从参与的代谢路径看，这些基因主要参与基础代谢和次生物质 1 factor 调基因FHI(calmodulin-related shock Tu)，FH67(heat protein)，FH42(elongation 90)参与植物与病原菌的互作。这一结果提示钙信号介导诱导结构抗性、乙烯信 protein 号介导抗病和未知R介导抗病是陆地棉2l号抗黄萎病的三条可能的途径。 技术，鉴定到瑟伯氏棉57个上调表达差异蛋白点，代表了51个已知同源蛋白，占总蛋 白点的11％。这些蛋白参与抗病抗逆、转录调控、蛋白质加工与降解、光合作用、产能 和基础代谢等过程，表明瑟伯氏棉抗病性是多种基因协同作用的综合效应：同时，5个 起主导作用。 (3)克隆了两个陆地棉结构抗性基因GhDIR 分析表明，该基因与海岛棉的同源序列表现了最高的相似性；后者编码区全长为393 bp， 编码130个氨基酸的小蛋白，蛋白序列分析表明，该蛋白具有保守泛素结构域和C端双 该蛋白与蓖麻的同源序列表现了最高的相似性。两基因均无内含子，均受黄萎病菌诱导 表达。两个基因的克隆，为进一步研究陆地棉的诱导结构抗性机理奠定了基础。 (4)克隆了瑟伯氏棉根的GPIP基因，全长l 个氨基酸残基。分析表明，该蛋白属LRR蛋白超家族，有一个信号