棉花显性无腺体因Gl2e的精细定位.pdfVIP

摘要 棉花是世界上最重要的经济作物之一，它给人类提供了天然纤维。除此之外，它还 是重要的油料作物，棉籽中含有极丰富的脂肪、蛋白质、碳水化合物、纤维素、矿质元 素等。但是，至今为止，棉籽蛋白都不能得到很好的应用，主要的原因是目前种植的棉 花品种中都含有大量的色素腺体，而这些化合物对人以及其他的单胃动物有毒害。腺体 中的棉酚等一些萜类化合物阻碍了棉籽的有效利用，但是贮藏在棉花植株中的棉酚却能 使棉花自身具有抗病虫害的功效。为了能更有效地发挥棉籽的重要作用，低酚棉育种工 作已经成为了世界各国的研究重点。因此，为了能更有效地发挥棉酚的功效，得到植株 有腺体而种子无腺体的理想材料成为了目前育种工作的重中之重。然而，现在所拥有的 低酚棉品种大都是由隐性无腺体基因所控制的，由于陆地棉容易发生天然异交现象，使 得在无腺体的材料里面容易产生有腺体的植株，所以一直不能得到很好的推广。 由显性无腺体基因Gb8控制的低酚材料的出现，无疑给低酚棉育种提供了一个很重 要的基因资源。遗传学研究证明，Gb基因被定位于棉花的第12染色体上，作为它的复 等位基因的Gb8也位于第12号染色体上。但到目前为止，还没有任何关于该基因被分 离和克隆的报道，因此，对该基因的精细定位以及克隆都具有非常重要的意义。 本研究是在前人的基础上，利用SSR分子标记技术并结合棉花基因组测序工作的开 展，对目标基因进行了更精细的定位。本实验采用“中棉所12号(中12)”及其近等基 因系材料“中棉所12号显性无腺体(中12显无)”为亲本构建了包含2302个单株的 F2群体，对棉花无腺体基因Gb8进行了精细定位，为之后能更好的分离和克隆棉花显性 无腺体基因以及相关基因奠定了基础。本研究主要取得的结果如下： 通过对F2群体材料不同时期不同部位的调查，结果显示：表现与中12有腺体性状 0 花的显性无腺体性状是由一对不完全显性基因所控制。 根据先前已经发表的与棉酚显性无腺体基因紧密连锁的SSR标记NAU2251以及棉 花A组基因组测序数据分析结果，在现有的基因组J芋列信息中找到了NAU2251所在的 序列大片段。通过分子标记与·腺体性状的联台分析，证明该片段是目的基因Gb。所在的 TTT’ 序列片段。 首先利用含有200个单株的遗传分离群体对G矿基因进行粗定位，在所获得的大片 段的不同位置根据序列信息分段设计SSR引物，进行SSR分析，通过分子标记基因型 分析与材料的表型性状相结合，我们将G128基因初步锁定在物理距离大概为340Kb的范 围内。 在进一步的实验中，挑选F2群体中的所有无腺体材料共592个单株作为精细定位 析，根据重组单株个数的减少和重组率的降低将G128基因进一步的缩小在物理距离大约 为7．5Kb的范围内，我们结合本实验室所拥有的棉花A基因组序列信息，以及对该序列 的分析与注释，在锁定的区域得到了一个候选的预测基因，对该预测基因做了初步的荧 光定量的验证，结果证明该预测基因在有腺体材料和无腺体材料中有较大的表达差异， 但是否为所要找的目的基因，仍需要进一步的功能验证。 关键词： 棉花，棉酚，G∥，精细定位，SSR，显性无腺体基因 Abstract Cottonisa andfeed fiber,oil wellassomewild crop．Cultivatedcotton，as species，containsgossypol， a thatis factorofthecotton polyphenoliccompound self-defense insect major plant’S systemagainstpests and some itistoxicforhumanand diseases，but