猪Myostain基因RNA干扰及启动子研究.pdfVIP

捅要 摘 要 growingfactor-B)超家族成 肌肉生长抑制素(myostatin，MSlN)，是TGF-13(transforming 员，是肌肉细胞的自分泌因子，主要在动物骨骼肌中特异性表达并对肌肉的生长发育起到负 调控作用。该基因敲除的小鼠，其骨骼肌重量增加到正常小鼠的两倍左右。RNA干扰(RN加) 是一种特异性降解靶基因mRNA序列的基因表达调节机制，具有高效、特异、快速等优点， 已成为研究基因功能和表达调控的有效方法。因此，本实验利用PCR方法以猪骨骼肌cDNA 个干涉位点，设计合成三对特异的shRNA干扰序列和一对非特异的shRNA干扰序列，通过 退火形成双链后依次将其连入带有U6启动子的干涉载体pGenesil．1上，构建干扰载体。得 2和shRNA3对 个干扰片段均在一定程度上下调了MSTNmRNA的表达。shRNAl、shRNA 基因的表达但是差异不显著，3对干扰序列间干扰水平无明显差异。 同时本研究中，对Myostatin基因启动子功能进行了研究。利用PCR方法从猪基因组DNA 中分离了1．2 胞，对猪Myostatin基因启动子的转录调控活性进行鉴定。结果表明，本实验成功克隆了猪 观察到GFP的表达，说明Myostatin基因表达的肌肉特异性源于启动子的转录特异性。 关键词Myostatin；RNA干扰；Myostatin启动子；猪胎儿成纤维细胞；C2C12 Abstract of onRNAInterferenceandPromoter Studies PorcineostatinGene My Abstract knownas differentiationfactor a GDF-8(growth 8)，is Myostatin(myostatin，isrr0，also memberof isaautocrinesecretionfactorof TGF-B(transforminggrowingfactor-B)superfamily．It themuscle inskeletalmuscleand cells，which negativelyregulated mainlyspecificitlyexpressed and ofmuscle．Theknockout hadincreasedabouttwice growthdevelopment mice，muscleweight tothenormalmice．RNA a mechanismthat expressionregulatoW interference(RNAi)isgene mRNA of and efficient，specificrapid，etc