粘质沙雷氏菌的生质体诱变及及几丁质酶的研究.pdfVIP

摘要 摘要 marcescens)的几丁质酶活力，对 本文为进一步提高粘质沙雷氏菌(Serratia 本实验室分离并保存的一株粘质沙雷氏菌RZ21菌株，进行原生质体紫外线与 NaN02复合诱变，经过平板几丁质透明圈初筛与摇瓶复筛，筛选出一株高产几 丁质酶的诱变株NU2，其所产几丁质酶的活力相比出发菌株提高了2．75倍，并 对其产酶的培养基配方及培养条件进行了优化，最后做了几丁质酶的相关性质 研究。 在诱变实验中，首先分别进行了原生质体紫外线和化学诱变剂NaN02的单 因子诱变，结果表明，原生质体紫外线诱变的效果要好于化学诱变剂的；在复 合诱变试验中，菌悬液先经过化学诱变剂NaN02诱变之后再经原生质体的紫外 线诱变的方法具有较好的诱变效果，HC值相比出发菌株CK提高了60．8％，且 菌株的遗传稳定性较好。 在培养基配方优化试验中，经过单因素试验与正交试验的优化，培养基配 方确定为：最佳碳源为7．59／L玉米粉，最佳氮源为5．09／L蚕蛹粉，无机盐NaCl 浓度为7．59／L。除了传统碳氮源及无机盐条件的优化外，本研究结合几丁质酶 的可诱导性，通过多1-N几丁质作为诱导剂提高了酶活的诱导效果。结果表明， 胶体几丁质由于其颗粒较小，与酶的活性部位接触表面积较大等优点，诱导效 果要优于粉末状几丁质，其中5mg／L的胶体几丁质的诱导效果最好；而粉末状 150目的几丁质诱导效果略低于粉末状50目的几丁质。在培养条件优化方面， 最佳培养条件为：培养温度30。C，初始pH8．0，装液量40mL／250mL，150rpm 培养30h。在此最佳培养基配方及最佳培养条件下，粘质沙雷氏茵诱变株NU2 所产几丁质酶的活力为410U，为初始培养基的4．23倍。 采用25L发酵罐培养粘质沙雷氏菌NU2诱变株，菌悬液依次进行高压细胞 破碎、硫酸铵沉淀与透析等方法提纯几丁质酶。用纯酶进行水解胶体几丁质的 酶学性质研究，结果表明该诱变株NU2所产的几丁质酶有热稳定性及pH稳定 性较好等优点。该酶的最适反应温度为37。C，在4-60。C之间酶活比较稳定。最 适反应体系为pH8．0的0．02M磷酸盐缓冲液，酶在pH5．0．9．0之间较为稳定。 镁离子对酶活促进较大，而金属离子螫合剂EDTA则抑制酶的活性。 关键词：几丁质酶，复合诱变，条件优化 Abs仃act Abstract In this suchasfurther thechitinase paper,somequestions enhancing activity RZ2 strain andstoredfromSerratia producedby 1，a separated marcescens， theculturemediumandculure optimizing conditionswerestudiedto some produce basisforits in aSabiocontroIbacterium． applicationagriculture meansof theradiationof andthe By ultraviolet，NaN02 protoplast respectively thesame ofclearzonesand o