离子束辅助农杆介导草酸氧化酶OXO基因转化大豆成熟胚的初步研究.pdfVIP

摘 要 摘要 大豆是重要的粮食作物和油料作物，是世界上植物蛋白和食用油的主要来 源。大豆菌核病是世界性的大豆病害，可对大豆的产量和品质均造成很大危害， 因此，抗病大豆的育种成为我们重要的研究目标。 许多致病真菌都是通过分泌草酸而使植物受到危害的，而革酸氧化酶可以把 草酸分解为H202和C02降解草酸，减轻其对植物体的毒性，从而延缓病原真菌 的侵染，在植物的抗病防御、抗盐胁迫及发育过程中发挥着重要作用。 然而，大豆基因库有限，至今没有发现抗菌核病的品种，而且传统育种所需 时间又过长，所以随着分子生物学的广泛应用和转基因技术的F1渐成熟，通过基 因工程方法获得优良的作物品种已成为现阶段遗传改良更省时有效的方法。因 此，通过基因工程方法调控植物体草酸氧化酶的含量，为大豆抗病的研究提供了 新的方向。离子束介导转基因是1989年余增亮提出来的，利用离子束介导转基 因可以避开大豆再生体系困难的问题，而且便于取材，打破了传统方法的受限于 季节的难题，便于大批量的操作，可以提高大豆抗病育种的效率。 本实验将草酸氧化酶OXO基因与绿色荧光蛋白GFP基因连接，构建了植物 表达载体并转化大豆： 1．大豆成熟种子胚土培体系的建立 对影响大豆成熟种子胚土培法的各种因素进行比较，探讨总结出一套适于 离子束介导转基因后续操作的植株培育方法。 2．植物表达载体的构建 株LBA4404。 3．离子束辅助农杆菌介导的遗传转化体系的建立 浸染大豆成熟种子胚，经筛选、Gus染色及PCR检测，最终获得4棵阳性植株。 关键词：离子束；草酸氧化酶(OXO)；大豆；成熟种子胚 Abstract the isan food andoil isthemainsourceof crop crop，it important Soybean isoneof sclerotiorum theworld．Sclerotina edibleoilallover and vegetableprotein boththe and of can outputqualitysoybean-So， diseases，itseverelyimpair soybeall ouraimofresearch· becomes ofdisease．resistant breeding soybean oxalic oxalate harm bYsecretingacid(OA)，but plants Manypathomycetes and its todelay OAdownintoH202C02，relievetoxicity canbreak oxidase(OXO’l