糖尿病大鼠第四室外侧隐窝室管膜的形态学观察.pdfVIP

中 英 英 研 结论……………………………………………………………………．51 参考文献………………………………………………………………52 综述室管膜的结构和功能…………………………………………………54 致{射…………………………………………………………………………67 个人简历……………………………………………………………………68 细胞的分布情况。探讨该部位在糖尿病发病过程中的变化和意义。 组：正常对照组、造模2周组、造模4周组、造模8周组；各组选取20 验结果进行统计学分析，观察各组相互间的关系。 1 l型糖尿病大鼠模型制备：动物于诱导前禁食、不禁水12小时后，用 药组动物予以一次性腹腔注射链脲佐菌素60mg／kg，制备1型糖尿病动 物模型；对照组动物给予一次性腹腔注射无菌柠檬酸／柠檬酸钠缓冲液。 2石蜡切片标本制备：10％水合氯醛麻醉，常规经心灌注、固定、取 材，冠状方向去除小脑以前部分，取包含第四脑室外侧隐窝的脑块，常 规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。常规HE．染色、NF．gB免疫组化染 色、封片。显微镜观察、照相。 3电镜标本制备：麻醉、灌注同石蜡切片标本制备，但灌注液为含2％多 聚甲醛和2．5％戊二醛的混合磷酸缓冲液。取包含第四脑室外侧隐窝的脑 块用PBS冲洗，梯度酒精脱水，叔丁醇置换，真空干燥、喷金，日立S． 3500N扫描电镜观察、照相。透射电镜样品制备与扫描电镜样品制备相 同，取包含第四脑室外侧隐窝的脑块，放入4％戊二醛固定，1％锇酸后 固定，树脂包埋，切片，电子染色，T-S7500透射电镜观察、照相。 4冰冻切片制备：麻醉、灌注、取材同石蜡切片标本制备。样品块依次 在15％和30％的蔗糖磷酸缓冲液中浸泡至沉底，冰冻切片机切片，切片 育；再清洗后明胶载片捞片；裱片；风干；中性红复染；常规脱水透 明：中性树胶封片；观察照相。 5统计学处理：NF。KB阳性细胞采用麦克奥迪数码医学图像分析系统 (MoticMed 6．O)测定平均光密度值。数据用均数加减标准差(f±s)表 中文摘要 示。应用SNK．q检验，进行两两比较，以P0．05为有显著性差异。 结果： 1大鼠在造模前血糖值低于8．9mmol／L，一次性腹腔注射链脲佐菌素 (STZ)造模5天后血糖值16．7mmol／L，提示糖尿病动物模型制备成 功。 2光镜及NF．ICB免疫组织化学观察结果 2．1对照组：第四脑室外侧隐窝室管膜细胞呈单层排列，胞体呈矮柱状 或立方形，大小规则，排列均匀整齐，胞核呈椭圆形或圆形；NF．rB免 疫细胞胞核不表达，胞浆呈浅棕黄色。该区域平均光密度值为 169．89士3．OO。 2．2模型组：造模2周组，室管膜细胞排列疏密不等，胞体大小不均，胞 核梭形或椭圆形；NF．r,B仍仅表达在细胞胞浆，染色呈浅棕黄色；胞核 排列密集且呈凹凸不平的波浪样，局部呈双层排列，表面纤毛密集，细 胞核多样性，排列不整齐；NF．1cB表达在胞核，阳性细胞胞核呈深棕褐 色；胞浆呈弱阳性。该区域平均光密度值为181．43-4-2．43。在造模8周组， 室管膜细胞单层排列且稀疏，细胞胞体形态扁平，细胞核呈梭形，脑室 面纤毛稀疏；NF．1cB免疫组化染色胞核表达消失；细胞胞浆染色浅棕黄 色。该区域平均光密度值为177．21：1：2．30。结果显示，糖尿病室管膜细胞 NF．r,B免疫阳性细胞平均光密度值，模型组和对照组有显著性差异(P O．05)；造模4周组与造模2周组、造模8周组比较均有显著性差异(P O．05)；造模2周组与造模8周组无显著性差异(PO．05)。 3扫描电镜观察结果 3．1对照组：低倍镜下观察显示，第四脑室外侧隐窝从入口到出口为沿 小脑中脚下方向外延伸，越过下脚向腹侧延伸形成的弯曲管状结构，局 部隆起。高倍镜下观察显示，此处室管膜细胞结构规整，轮廓清晰，胞 体呈梭形或多边形，游离面有丰富丛密的纤毛；纤毛之间可见微绒毛。 室管膜细胞表面可见少量散在的球形分泌颗粒，表面光滑，大小不等， 室管膜上纤维少见。 3．2模型组：造模2周组室管膜细胞整体轮廓不清晰，凹凸不平，纤毛 丛密且排列紊乱，分泌物呈颗粒状，密集、大小不等、形态不规则，多 中文摘要 呈片状或团状分布，分泌物表面有的光滑、有的粗糙或有皱褶；紧贴室 管膜细胞上皮表面或纤毛根部可见有梭形膨体的单根纤维，该纤维分支 少见。造模4周组室管膜细胞纤毛排列紊乱，局部稀疏粘连成缕；微绒