黑果枸杞内生真菌次生代谢产物及抑菌活性研究.pdf

JIllll lll Ulll Ul l IlllI Y2308097 THESECONDARYMETABOLITESAND ANTIMICROBIALACTIⅥTYOLF FUNGIFROM三l，c比17：?M欠之厂脚?1汀C硼夕 AThesisSubmittedto Shaanxi ofScienceand University Technology inPartialFulfillmentthe forthe of of RequirementDegree Supervisor：Prof．Yang-MinMa． 2013 May 黑果枸杞内生真菌次生代谢产物及其抑菌活性的研究 摘要 自从美国蒙大拿州立大学的Strobel教授从红豆杉Taxus brevifolia的 表皮部分离出一株产紫杉醇的内生真菌后，至今已有20多年的历史了。 药用植物内生真菌作为微生物家族中的重要一员，因其长期寄生于植物 内，科学界普遍认为其可以产生与宿主植物具有相同或者相似结构功能 的代谢产物。时至今日，药用植物内生真菌已经成为新型药物的重要来 源，但是随着研究的不断深入，内生真菌被重复研究的现象也越来越严 重，为了避免内生真菌被重复研究，本文将研究目标对准了耐盐内生真 菌。 以藏药黑果枸杞为研究对象，分别从其根、茎、叶中分离内生真 菌，采用高盐碱分离方法和常规分离方法，共分离得到内生真菌81株， 其中耐盐内生真菌21株，常态内生真菌60株。对81株黑果枸杞内生真 O科，13属。其中曲霉属 菌进行形态学鉴定，分属于7目，1 (Aspergillussp．)占37．04％，丝核菌属(Phomasp．)占9．88％，曲霉 属为优势菌属。通过对黑果枸杞各个组织的内生真菌分布情况进行分 析，结果发现从根部分离得到60株内生真菌，占总数的74．07％，比例 最大。 采用6种细菌作为测试菌，测试81株黑果枸杞内生真菌的抑菌活 性，同时又采用6种细菌，6种病原真菌作为测试菌，测试81株黑果枸 杞内生真菌的代谢产物抑菌活性。结果表明E21菌株的活菌和代谢产物 mm．31 抑菌圈直径均在26 mm之间，抑菌活性最好，因此确定菌株E21 为目标菌株。对E21菌株进行ITS序列测定，最终将E21菌株鉴定为白 lacteus)。 耙齿菌(Irpex 采用固体发酵对E21菌株进行发酵，得到其代谢产物粗浸膏(138．94 g)。应用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、C18柱色谱等柱色谱，结合重结晶 等纯化手段，分离得到7个化合物。对所得化合物结合理化分析以及核磁 共振、高分辨质谱等光谱分析手段，最终确定了化合物的分子结构，7个 K、monacolin K、5a，8a．环二氧麦角 化合物分别是：dehydromonacolin 甾．6，22一二烯．3p．醇、麦角甾醇、胡萝I-苷、50L，60【．环氧．24(R)．甲基胆甾． K、monacolin