TGF-β-%2c1-对体外培养人关节软骨细胞的生物学行为的影响及在软骨组织工程中的应用.pdf

TGF一13 1对体外培养人关节软骨细胞生物学行为的影响 及其在软骨组织工程中的应用 摘要 f在软骨组织工程的研究中，获得足够量的有功能和活性良好的种子软骨细胞，是 构建质量良好的组织工程化软骨的重要前提。成体软骨细胞，来源少，体外增殖能力 十分有限：此外，在传代培养过程中，软骨细胞易发生去分化现象，失去特异性的形 态和生物合成表型。因而，如何使少量的软骨细胞，在体外较短的时间内实现有效增 殖，并维持合成特异性基质的能力，是目前软骨组织工程研究者必须逾越的“瓶颈” 障碍。 解决这一难题的策略包括：增加细胞的传代次数，增强细胞的增殖活性，防止或 延缓细胞去分化等。为此，将各类以生长因子为代表的生物活性因子的作用引入组织 工程软骨研究的各个阶段，已有了较多的报道。其中，TGF．B作为对体内骨骼系统 发生和发育有重要调节作用的生长因子，其在体外对软骨细胞的增殖、代谢等功能的 作用也有了较广泛的研究。然而，由于TGF．13生物学作用的多样性和体外环境复杂 因素的影响，目前在软骨组织工程中的应用还基本处于“黑箱”操作阶段。TGF—e 是否是软骨组织工程构建所必须的生长因子，以及如何合理应用，仍是必须认识和解 决的问题之～。； f 本研究首次系统地观察了不同浓度的TGF一0、对体外单层培养1—8代人关节软骨 细胞的增殖、活性、II型特异性型胶原合成能力以及细胞形态的影响；初步观察了传 R 代软骨细胞的TGF．13I和R II的表达和变化规律；并对TGF．0．导致软骨细胞的形 态和功能变化的内在机制进行了探讨。 本研究采用CeliTiter96$单溶液细胞增殖分析试剂盒测定体外培养中的软骨细 RI、R 胞的增殖活细胞数量；免疫组化法测定软骨细胞TGF—B II，II型胶原和S一100 一‘～～ 蛋白的定性表达；酶免分析法测定TGF．B。作用后的II型胶原定量表达：通过图象分 R 析仪，对TGF一13I、RII的免疫组化染色结果进行半定量分析； 本研究的实验结果如下： 1．TGF．B。对体外单层培养软骨细胞增殖表现为先抑制，后促进的双向调节作用。 抑制效应存在剂量依赖性，浓度越高，抑制效应越明显；在相对低浓度和部分换 液的条件下，促进效应发生早，持续时间长。 2． 液，均不能产生促细胞增殖作用。 3．TGF—B-在促进细胞增殖的前提下，显著增加体外单层培养一周的软骨细胞的II 型胶原合成总量。 4．随着传代次数的增加，在常规培养条件下，软骨细胞趋于成纤维细胞样表型，以及 II型胶原合成和分泌的下降；在TGF．B。作用下，软骨细胞多维持多角形或椭圆 性的正常形态表型，生长过程中的细胞集落和多层生长现象明显，且活性维持好 于无TGF．0。作用者。 R 5．在常规培养条件下，原代和传代骨细胞均普遍表达TGF—BI和R II，但在缓慢 增殖期和指数增殖期，RI的表达强度前者高于后者，RII的表达水平前后无显著 变化。 6．S-100蛋白在1_8代软骨细胞都有普遍表达，其强度不受传代因素的影响。 本研究结论： 1．在体外，TGF．B。对人关节软骨细胞表现为双向的增殖调节作用。增殖效应的发 挥，与细胞密度和TGF．B．浓度(综合表现为对应单个细胞的TGF—B。的剂量)， R 与细胞在培养过程中的增殖状态以及与之伴随的TGF一13I／RII的比率的变化， 与TGF—B．的刺激频率和换液方式等，均有密切关系。 2．TGF—B。在促进细胞增殖的前提下，能增加软骨细胞的II型胶原合成总量。 3．TOF．13。在引起软骨细胞的功能变化的同时，导致的形态学变化有利于在同样的