水牛精液双向电泳技术的初步与研究.pdfVIP

水牛精液双向电泳技术的初步研究 摘要 精子发育的各个阶段均有大量的蛋白质参与，分离和鉴定精子相关蛋 白质，可为在蛋白质水平上阐明精子发生机制，揭示雄性不育机理提供重 要信息。本试验以水牛精子和精浆为研究对象，建立了双向凝胶电泳技术 一质谱技术(2DE．MS)分离、分析精子／精浆蛋白质组的技术平台，为实验 室今后深入开展水牛精子蛋白组学研究提供可行的技术理论体系。 通过对不同蛋白质提取方法、IPG胶条和不同上样量等相关参数的比较 cm 和优化，结果显示，选用裂解液B，24 上样量的方法，得到清晰的水牛精子蛋白质双向电泳图谱，运用 2D ImageMaster 分布在等电点4～7之间，蛋白质分子量范围约40～90kDa。水牛精浆中选 cm 用13 白质点，蛋白质分子量范围26～66 4～7之间，并且 kDa，主要分布在pH 在14kDa附近有高丰度蛋白。 选取约250个丰度较高的蛋白质点进行质谱鉴定，用于初步构建精子 4800 蛋白质组表达谱。胶内酶解后使用AB 谱仪肽段质量指纹图谱，通过数据库搜索后，成功鉴定出151个蛋白质信 分子功能和生物学过程方面分析蛋白质在精子发育过程中可能的功能。 综上所述，本研究建立了适合分离水牛精子蛋白质的双向电泳体系， 结合质谱鉴定手段，获得了较好的双向电泳图谱和部分蛋白质表达谱信息， 为下一步开展水牛精子差异蛋白质组学研究打下基础。 关键词：水牛精子精浆双向电泳质谱表达谱 lI PRELIMINARYSTUDY0N OFBUFFAL0SEⅧN ELECTROPHORESIS ABSTRACT Therearea numberof to a invarious of large proteinsplaypart stages andidentification of will spermdevelopment．Separationsperm-relatedprotein themechanismof andmale on explain spermatogenesisinfertilityproteome level．Inthis proteomics basedonthe study,the technologyplatform Two—dimensional Gel Electrophoresis-Mass and ofbuffaloWas separatinganalysisingsperm／seminalplasmaproteome afeasibletechnicalandtheoreticalforthe established，which provided systems ofbuffalo study