维甲类X受体在心肌中的表达规律调控对心肌损伤的保护作用.pdfVIP

上海交通大学博士论文 中文摘要 维甲类X受体在心肌中的表达规律及其调控对心肌损伤 的保护作用 摘要 氧化应激损伤是动脉粥样硬化、心肌梗死、糖尿病心肌病等疾病的重要发病 机制，而其诱导的心肌凋亡发生是造成心肌梗死及心肌病预后不良的主要原因。 深入研究与氧化应激损伤及心肌重构有关的凋亡调控机制，寻找有效的心肌保护 的药物靶点，一直是生命科学研究中最活跃的前沿领域之一。 维甲酸核受体家族是近年来发现的细胞核受体超家族中的一个重要成员。维 甲酸核内受体家族的发现，是人们认识维甲酸类化合物如何发挥其作用的重大突 acid 破。维甲酸核内受体分为维甲酸核受体(retinoicreceptor，RAR)和维 X 3种亚型。 甲类X受体(retinoidreceptor，RXR)两类，各包括0，13，Y 在核受体超家族中，RXR是颇为独特的一员：RxR受体能与其他多种细胞核受体 发生交互作用(cross-talk)，在调节多种信息传导途径的激素基因网络中可能 起中心作用。早年的研究表明RXR在心脏发育中有着极其重要的作用，RXRQ敲 除的胎鼠(RXRQ一／一)出现心室腔发育不良，表现为室壁极薄和局部室间隔缺损， 心室收缩功能减弱，而胎死腹中，原因可能与心肌细胞凋亡增加有关，提示RXR 信号通路可能参与心肌细胞的增殖、分化以及发育的调控。但相对于在肿瘤细胞 和血管内皮细胞的大量研究，有关RXR在心肌的表达和调控的文献报道有限。RXR 在心肌中是否存在普遍的表达，其表达的规律如何，受何种因素的调控尚未明确。 我们在前期工作中，发现过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡中RXR的表达下调， 活性下降。RXR激动剂9-cisRA则对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡有保护作用， 这个保护性效应可被RXR拮抗剂HX531所阻断。那么进一步研究RXR对缺氧复氧 以及高糖氧化应激引起的心肌细胞损伤的作用及可能机制，是非常有意义的工 作，于是我们在离体和在体两个水平上，以H9c2心肌细胞株、原代培养的新生 大鼠心肌细胞及成纤维细胞、Balb／C小鼠心肌为研究对象，首先明确RXR在心 肌细胞的表达规律，然后分别探讨在缺氧一复氧和高糖氧化应激触发的线粒体功 能失调和细胞凋亡中，给予RXR激动剂和拮抗剂干预，是否出现保护性效应，其 可能的机制是什么。本研究的结果从新的角度丰富了缺血缺氧性心肌损伤及糖尿 病性心肌病的病理机制，并为进一步设计和筛选新的防治药物靶点提供理论依 上海交通大学博士论文 中文摘要 据。 第一部分维甲类X受体在心肌中的表达、分布及调控规律 目的：为了明确RXR在心肌中的表达、分布及调控特点，本研究从离体和在 体两个水平观察RXR的表达及分布规律，并探讨其表达是否受高糖、缺氧复氧等 病理性损伤因素的影响。 方法：体外培养H9c2心肌细胞、原代培养的新生大鼠心肌细胞及成纤维细 胞，建立心肌细胞缺氧／复氧损伤模型，以STZ腹腔注射法建立糖尿病小鼠模型。 免疫荧光双标法观察RXR在H9c2心肌细胞、原代培养的新生大鼠心肌细胞及成 Q、 纤维细胞的表达；免疫组化方法检测小鼠心肌RXR表达；RT—PCR方法检测RXR p、Y三种亚型mRNA在心肌细胞中的表达规律；WesternBlotting方法检测在 高糖、缺氧复氧刺激下，心肌细胞RXR的表达变化。免疫荧光双标法观察心肌细 胞RXR在高糖、缺氧复氧刺激下是否出核；WesternBlotting及免疫组化检测 糖尿病小鼠心肌RXR表达变化。 结果：(1)RT-PCR方法表明在心肌细胞中RXRQ、13、v三种亚型mRNA都有 表达，其中RXRQ的表达量最高。(2)免疫组化方法在成年小鼠心肌观察到也有 RXR的表达。(3)免疫荧光双标法在H9c2心肌细胞、原代心肌细胞及成纤维细胞 都检测到RXR的表