皮肤成纤维细胞中dystrophin基因表达及研究.pdfVIP

摘要 摘要 目的： 研究皮肤成纤维细胞中dystrophin 皮肤成纤维细胞作为转化有遗传缺陷肌细胞研究时供体的可行性。 方法： 1、组织块法体外培养O～1日龄正常小白鼠皮肤成纤维细胞，待细胞爬满 培养皿后除去组织块，用0．25％胰酶消化处理，按1：3传代。然后通过RT-PCR 和WeStcmblot技术分别检测经培养的小白鼠原代及第1～4代皮肤成纤维细胞 中dystrophin mRNA及dystrophin的表达。 2、将小白鼠骨骼肌、心脏、肝脏、肾脏和皮肤组织剪碎后放入液氮中研磨， 然后加裂解液匀浆，最后通过RT-PCR和Westernblot技术分别检测小白鼠各组 织中dystrophinmRNA及dystrophin的表达。 3、将小白鼠骨骼肌和皮肤组织剪碎放入液氮冻后再碾磨成细颗粒状，加入 裂解缓冲液匀浆至不见组织块，最后通过PCR检测确认小白鼠皮肤成纤维细胞 基因组DNA中含有dystrophin基因。 结果： 1、RT．PCR结果： (1)细胞水平上检测：小白鼠骨骼肌(阳性对照)经扩增，产物呈573bp 的特异性DNA条带，而经培养的小白