实验二：营养器官组织培养.docVIP

实验二 营养器官组织培养 一、实验目的与意义 培养材料的灭菌与接种是组织培养过程中一个重要的环节。通过本实验，领会无菌培养对实验材料消毒，接种的要求，初步掌握培养材料灭菌，接种的操作技术。此外，营养器官组织培养是最基本的植物组织培养技术之一，本实验还要求初步掌握常见园艺作物茎段的组织培养方法。 二、实验器材 超净工作台、镊子、解剖刀、酒精灯、脱脂棉、烧杯、培养皿等。 三、实验药品及材料 次氯酸钠、酒精、无菌水、柑橘等园艺作物茎段、培养基等。 四、实验步骤 （1）准备好培养基，无菌水，培养皿及接种工具。 （2）将培养基、无菌水、接种工具置于接种台上，打开超净台紫外灯开关，同时打开接种室内的紫外灯，用紫外灯照射至少25分钟，然后关室内的紫外灯，开送风开关，关闭台内的紫外灯，通风十分钟后，再开日光灯进行无菌操作。 （3）接种前用肥皂洗手，特别是将手指洗净，然后用沾有75%酒精的棉球把手消毒一次。 （4）将柑橘等园艺作物茎段在流水下冲洗干净。 （5）将茎段放于200ml的烧杯中，用75%的酒精溶液浸泡30s，无菌水冲洗，然后用2%次氯酸钠 使用浓度（%） 消毒难易 灭菌时间（min） 消毒效果 乙醇 70～75 易 0.1～3 好 氯化汞 0.1～0.2 较难 2～15 最好 漂白粉 饱和溶液 易 5～30 很好 次氯酸钙 9～10 易 5～30 很好 次氯酸钠 2 易 5～30