油酰海藻酸纳米口服运送载体的制备与性质研究.pdf

油酰海藻酸纳米粒口服运送载体的制备与性质研究 摘要 纳米载体系统能够改善营养物质的溶解性、稳定性、生物利用度等性质。海 藻酸钠具有良好的生物可降解性和生物相容性，在食品医药领域都得到了广泛应 用。本论文首先制各得到了油酰海藻酸，并且分别用超声辅助分子自组装法和乳 化法构建了油酰海藻酸纳米粒，在纳米粒中分别包埋了维生素D。和维生素E，并 研究了包埋效率和缓释效果。最后以Caco一2细胞模型和外翻肠模型，考察了生 物相容性、吸收和跨膜转运作用。 首先，在无有机溶剂的条件下，将油酰基团接枝到海藻酸分子上，制备得到 油酰海藻酸(OAE)，利用红外光谱和核磁共振的方法检测酯化产物的形成。然后 用响应面分析的方法对合成过程进行了优化，经优化得到的最佳试验参数为： 4．95 ml甲酸，11．27m1油酰氯，反应时间20min，反应温度50℃。此时取代 度为5％，产率93．99％。经实验验证，在以上最优条件下，所得产品的取代度为 4．93％，产率92．27％，与软件优化结果基本相符。 通过超声辅助分子自组装法制备得到OAE纳米粒，利用荧光光谱技术、透射 电子显微镜、动态激光散射粒度仪对纳米粒的理化性质进行了测定，并且研究了 OAE纳米粒在模拟胃肠液中的稳定性。结果表明得到了球形规则、形态完整、粒 nm降 径较小的纳米粒。随着OAE取代度增加，0AE纳米粒的粒径由559．3±9．5 到305．3±6．3nm，临界聚集浓度(CAC)由0．38mg／ml降到0．25mg／ml。与 蒸馏水中相比，OAE纳米粒在模拟胃液中仍然保持完整球形结构，在模拟肠液中 的形状变得不规则。0AE纳米粒在模拟胃液中的粒径变小，模拟肠液中的粒径变 大。OAE纳米粒在模拟胃液中，具有较高的热力学稳定性，在模拟肠液中具有较 低的热力学稳定性。 以VD。为模式营养物，利用超声辅助分子自组装法将其包埋到纳米粒中。随 着加入VD。量的增多，0AE纳米粒的包封率从67．6±2．76％降低到45．8±1．55％， 负载率从0．334-0．02升高至O．91±0．03％。并且研究了在模拟胃肠液中的缓释， 结果表明纳米粒具有缓释作用。 以vE为模式营养物，分别利用超声法和乳化法制各得到了载VE的OAE纳米 粒，两者都能制备得到纳米粒，但纳米乳剂具有比较高的载VE的能力。 通过离心的方法将纳米粒进行分级分离，些过程受到纳米粒Zeta电位、离心 速度的影响，zeta电位的绝对值越小，离心速度越快，纳米粒的沉降越快。本章 还通过差速离心的方法将一组纳米粒按照大小分成了四组组米粒。随着离心速度 4-1．92％ 升高，粒径从707．2±32．3nm降到78．2±19．9nm，负载率从12．35 降低至4．94±0．46％，它们的PDI值均小于O．47±0．03。 通过离心的方法成功分离出四组粒径大小不同的纳米粒，它们具有相似的 zeta电位，粒径大的纳米粒具有较高的载VE的能力。并且研究了粒径对VE的 稳定性、纳米粒的分散稳定性的影响。随着粒径降低，VE的稳定性升高，纳米 粒的分散稳定性提高。 利用MTT法检测了OAE纳米粒的粒径对细胞毒性的影响，结果表明四组纳米 粒对细胞均无毒。Transwell的跨膜转运实验表明，OAE纳米粒能够提高VE的透 nm，表观渗透系数从 过性。随着粒米粒的粒径从80nm升高到700 cm／s。 2．72±0．66×10。4降到0．94±0．43×10‘4 利用wistar大鼠肠环外翻法研究了OAE纳米粒的细胞吸收和胞吞机制。4 ℃的吸收远低于37℃，此结果表明纳米粒主要通过主动运输吸收。NP80和NP 130主要通过网格蛋白介导的内吞作用吸收，NP370主要通过小凹蛋白介导的内 吞作用吸收，NP700主要通过巨胞饮作用进入细胞。 关键词：海藻酸；纳米粒；粒径；胞吞作用：跨膜转运 of basedon ester