肿瘤条件培养基导血管平滑肌细胞凋亡.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………．1 英文摘要……………………………………………………………………．3 英文缩写……………………………………………………………………．6 研究论文肿瘤条件培养基诱导血管平滑肌细胞凋亡 前言……………………………………………………………………．1／日U舌……………………………………………………………………． 材料与方法……………………………………………………………．7 结果…………………一………………………………………………．12 附图……………………………………………………………………14 附表……………………………………………………………………．21 讨论……………………………………………………………………．22 结论……………………………………………………………………．24 参考文献………………………………………………………………24 综述细胞外基质与心血管疾病…………………………………………．．27 致谢…………………………………………………………………………43 个人简历……………………………………………………………………44 万方数据 中文摘要 肿瘤条件培养基诱导血管平滑肌细胞凋亡 摘 要 目的：肿瘤的生长和转移依赖于新生血管生成，而肿瘤新生血管缺乏 平滑肌层，血管的不稳定性为肿瘤的侵袭和转移提供了条件。近年来，有 关肿瘤血管生成的研究主要集中于肿瘤细胞与内皮细胞的相互作用。肿瘤 发生过程对血管平滑肌细胞(VSMC)特性有何影响至今尚无研究报道。本 研究采用肿瘤条件培养基(TCM)模拟肿瘤发生微环境，观察肿瘤细胞对 VSMC增殖的影响，并探讨其分子机制，为抗肿瘤药物的开发提供新思路 和作用靶标。 方法与结果： 1 TCM抑制VSMC增殖 MTT分析与细胞计数结果显示，与对照组相比，不同浓度TCM孵育 VSMC24 稀释倍数增多，其对VSMC增殖活力与细胞数量的抑制作用减弱。 2TCM不影响VSMC中PCNA的表达 为了确定VSMC增殖活力下降的机制，用Westernblot检测增殖标志 24 h并未影响 物PCNA(增殖细胞核抗原、)。结果显示，TCM孵育VSMC PCNA的表达。因此推测，VSMC增殖活力的降低、细胞数量的减少，可 能并非通过增殖抑制，而是凋亡诱导的结果。 3TCM诱导VSMC凋亡 Annexin V-FITC／PI试剂盒可检测细胞的早期、晚期凋亡活性，处理 后的样品可用流式细胞仪和荧光显微镜检测。流式细胞术结果显示，TCM 组的细胞凋亡高于对照组16．58 1．07 后者1 4-O．79％ 4-2．47％(尸0．01)，晚期凋亡前者高于后者5．51 (P0．01)。荧光显微镜结果也显示，TCM组的细胞凋亡明显高于对照组。 JC一1试剂盒可检测膜电位的改变，从而反映细胞的早期凋亡情况。 荧光显微镜结果显示，TCM组的早期细胞凋亡明显高于对照组。 TUNEL试剂盒可检测细胞凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。 荧光显微镜结果显示，TCM组的晚期细胞凋亡明显高于对照组。 万方数据 中文摘要 4TCM诱导VSMC中Caspase一3的活化 于胞浆中，其在凋亡早期阶段被激活，活化的Caspase．3由两个大亚基 (1 7KD)和两个小亚基(12Y①)组成，细胞凋亡的晚期和死亡细胞中，