2015-2016学年高二生物习题：专题5 DNA和蛋白质技术 课题1《DNA的粗提取与鉴定》(人教版选修1).docVIP

课题1　DNA的粗提取与鉴定 一、DNA的粗提取和鉴定 1．DNA的粗提取 (1)基本思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 (2)方法和原理： ①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 ②DNA不溶于酒精，但是某些蛋白质则可溶于其中。 ③蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。 ④大多数蛋白质不能忍受60～80_℃的高温而发生变性，而DNA在80_℃以上才会变性。 ⑤洗涤剂能瓦解细胞膜，但对DNA无影响。 2．DNA的鉴定 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。 二、实验设计 1．选取实验材料 选用DNA含量较高的生物组织，成功的可能性更大。 2．破碎细胞，获取含DNA的滤液 动物细胞的破碎比较容易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。 3．去除滤液中杂质 (1)方案一：通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质。 (2)方案二：直接向滤液中加入嫩肉粉，反应10～15 min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。 (3)方案三：将滤液放在60～75_℃的恒温水浴箱中保温10～15 min，注意严格控制温度范围，使蛋白质沉淀析出而DNA分子还未变性，可以将DNA与蛋白质分离。 4．DNA的进一步提纯 利用DNA不溶于冷却的4.95%酒精这一原理，可从滤液中析出较纯净的DNA，此时DNA的状态为白色丝状物。 5．DNA的析出与鉴定 (1)DNA的析出：DNA的析出用的是与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液。 (2)DNA鉴定：鉴定DNA时在试管中先加入物质的量浓度为2_mol/L的NaCl溶液5 mL。两支试管中其中一支加入DNA丝状物，各加入二苯胺4_mL。 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 三、操作提示 　(1)以血液为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。 (2)加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 (3)鉴定DNA用的染色剂二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。 一、选择题 1．由于鸡血没有找到，某同学尝试用猪的血液来代替，但结果没有成功，其最可能的原因是(B) A．操作方法不对 　 B．猪血含DNA过少 C．NaCl溶液浓度太高　 D．加二苯胺过少 解析：猪的血液中主要是红细胞，但猪的成熟红细胞中无细胞核，所以猪血细胞中DNA含量低。 2．DNA在下列浓度的NaCl溶液中，溶解度最低的是(C) A．2 mol·L－1　　 B．0.015 mol·L－1 C．0.14 mol·L－1 D．5 mol·L－1 3．DNA的粗提取与鉴定实验，与下列哪项原理无关(B) A．DNA在0.14 mol/L的NaCl溶液中，溶解度最低 B．DNA易被龙胆紫溶液染成紫色 C．DNA溶液中加入二苯胺试剂，加热后产生蓝色 D．加入95%的冷酒精，DNA会从溶液中析出 解析：DNA在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。DNA鉴定选用的试剂为二苯胺试剂，加热后(沸水浴)产生蓝色。加入95%的冷却的酒精，由于DNA不溶于酒精，DNA会从溶液中析出。 4．在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是(B) A．用蒸馏水将NaCl溶液的物质的量浓度调至0.14 mol/L，滤去析出物 B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质 C．将丝状物溶解在物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色 D．用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同 解析：用蒸馏水将NaCl溶液物质的量浓度调至0.14 mol/L，使DNA析出；调节NaCl溶液的物质的量浓度为2 mol/L，过滤可除去不溶的杂质，木瓜蛋白酶能够分解蛋白质；在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺试剂会被染成蓝色；如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂瓦解细胞膜。 5．在DNA析出与鉴定实验中加入酒精的目的是(B) A．溶解DNA B．除去DNA中所含的杂质 C．析出蛋白质 D．稀释溶液，降低浓度 解析：DNA不溶于体积分数为95%的酒精溶液而蛋白质可溶，从而把蛋白质和DNA分开。 6．下列叙述中错误的是(A) A．改变NaCl溶液的浓度只能使DNA溶解而不能使其析出 B．在沸水浴中，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色 C．加盐和加酒都能抑制微生物的