GSTUCP2N和GSTUCP2C原核表达载体的构建表达及多克隆抗体的制备.pdfVIP

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2015-11-07 发布于重庆
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GSTUCP2N和GSTUCP2C原核表达载体的构建表达及多克隆抗体的制备.pdf

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GSTUCP2N和GSTUCP2C原核表达载体的构建表达及多克隆抗体的制备.pdf

南京大学学报(自然科学) 第46卷第2期 V01．46。No．2 UNIVERSITY JOURNAL()FNANJING 2010年3月 Mar．，2010 (NATURAI。SCIENCES) 表达及多克隆抗体的制备白蕊，郭亚楠，卞桢，刘丹青，曾科“ (南京大学生物化学与分子生物学系，南京，210093) 摘要： N端和C端以pMDl8-T—huep2为模板，用设计的两对特异性的引物PCR得到hucp2cDNA 的两断基因片段，然后将其插入到pGEX一5X一1表达载体上。重组质粒在PCR、双酶切、测序鉴定后。经白为抗原免疫ucp2基}lj敲除小鼠，westernblot鉴定血清中抗体的反应性．实验证明成功构建了构建 pGEX-5X-1．ucP—N(c)重组质粒，表达出r融合蛋白．并获得了抗疵清．为进一步获得灵敏性更高．特异性更强的UCP2的抗体打下了基础．关键词：解偶联蛋白2(UCP2)，表达，多克隆抗体中图分类号： Q786 vector and construction，expressionpolyclonal Prokaryoticexpression offusion GST-UCP2一N(C) antibodypreparationprotein Bai Zhen，Liu Ke Rui，GuoYa—Nan，Bian Dan—Qing，Zeng (SehoolofLife Science，NanjingUniversity，Nanjing。210093，China) of of insertBamH Abstract： tO tWO and I andXhoI Accordingsequencehucp2，wedesignedpairsprimers restrictiveendonucleasesitesinto5’termitaland3’termital elonalvectoras we respectively．Usinghuep2 template obtainExtro-eellularof DNAat5’termital(82—249)and3’termital(706—927)，whicharenamedas fragmentgene and into vectortransforminto recombinedvectorswere inserted and E．coli．The uep2一Nuep2一C，then expressive identifiedPCR，restrictiveendonucleasesand