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奶山羊乳腺发育中乳糖的变化 1 曲波，李庆章* （东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨 150030 ） E-mail：qingzhang_li@126.com 摘 要：本研究应用PAS 检测奶山羊乳腺发育中乳糖的变化，希望在细胞水平上系统阐述其 变化规律。结果表明，乳糖在青春期和妊娠初期低水平表达，妊娠中期后逐渐增加，到泌乳 期达到最高，退化期迅速下降，逐渐恢复到青春期的水平。 关键词：乳腺；奶山羊；乳糖；PAS 中图分类号：Q492.7; Q133 1. 引言 乳腺（mammary gland ）是一个具有重要经济价值的器官，其生长发育和泌乳生理功能 [1-2] [3] 密切关系 。乳中主要的糖类是乳糖，不同动物乳中乳糖含量不同 。奶山羊乳中的糖类 物质有多种，其中乳糖含量为99. 8%[4] 。乳糖属于还原性二糖，目前还原糖的检测方法有很 多种，包括HPLC法、滴定法、比色法、旋光法等。但这些方法都要求样品为糖类的提取液， 需经过澄清处理，故多适用于食品、乳制品、饲料等乳糖的检测。本研究应用过碘酸-Schiff 反应（PAS ）直接检测乳腺组织，希望在细胞水平上系统阐述奶山羊乳腺发育过程中乳糖的 变化规律。 2. 材料与方法 2.1 实验动物与样品采集 采用青春期、妊娠期、泌乳期及退化期健康雌性关中奶山羊30只，经检测无乳腺炎及其 他疾病。实验羊采用舍饲，舍温18ºC，通风干燥，采光良好，自由采食饮水。 根据奶山羊乳腺发育特点，采样时点分为：青春期3月、5月；妊娠期1月、3月、5月； 泌 乳期10 日、60 日；退化期3 日、7 日、21 日，共计10个时点。每个采样时点选取3只奶山羊作 平行，每次试验至少重复3次。奶山羊处死后，用灭菌手术刀分离乳腺组织，迅速转入冻存 管中，液氮冻存后转入-80℃冰箱保存。 2.2 PAS 染色操作流程 3 将-80℃冻存乳腺组织修整为1cm 小块，冰冻切片（7~8 μm ），4 ℃保存备用。 将标记好的乳腺组织冰冻切片置于1%过碘酸水溶液中游离醛基5min；Schiff试剂避光染 色15min；亚硫酸水漂洗3 ×2min ，流水冲洗10min， ddH2O洗5sec；Delafield苏木精复染1 min； 乙醇梯度脱水；然后分别用1/2 （二甲苯＋无水乙醇）透明处理3 min、二甲苯透明处理2 × 5min；中性树胶封片；Leica DLMB-2显微镜观察、照像。 对照片不经过碘酸处理，直接进入Schiff试剂染色流程，则反应呈阴性或明显减弱。 1 本课题得到国家自然科学基金资助 (批准号: 1 3. 结果 3.1 青春期 青春期乳腺导管系统虽已经形成，但乳腺基本不发育。腺体内以脂肪和结缔组织为主， 未检测到乳糖的分泌表达（图1）。 图 1 青春期奶山羊乳腺中乳糖的变化 a. 青春期 3 个月（200 ×）； b.青春期 5 个月（400 ×）； c. 青春期 5 个月（阴性对照，200 ×） Fig.1 Changes of lactose in virgin mammary gland of dairy goat a. virgin 3 months (200 ×); b. virgin 5 months (400 ×); c. virgin 5 months (negative control, 200 ×) 3. 2 妊娠期 妊娠期1个月，未检测到糖类的表达（图2a ）。妊娠3个月，很难判断有乳糖的表达，即 便有分泌也是非常微量的（图2b ）。妊娠5个月，腺泡腔