制备液相色谱在天然产物中皂苷类化合物中的应用.pptVIP

制备液相色谱在天然产物皂苷类化合物中分离的应用 北京大学 天然药物及仿生药物国家重点实验室 傅宏征 drhzfu@ 一、简介 二、皂苷的提取分离 三、皂苷的结构解析 一、简介 1.1.皂苷的分布 1.2.皂苷的结构类型 1.3.糖的存在形式 1.4.皂苷中单糖的种类 1.5.皂苷的生物活性 1.6.制备液相色谱是皂苷分离纯化过程中的必要手段 皂苷的分布 皂苷的结构类型 1.四环三萜 2.五环三萜 1.四环三萜 2.五环三萜 皂苷中糖的存在形式 1. 在自然界中糖以环状半缩醛或酮形式存在，六碳糖多数以吡喃型存在，极少数以呋喃型存在。 2.糖与苷元的连接；以糖的端基碳通过氧原子连接于苷元或直接连于苷元的碳上。 3.糖链中糖与糖的连接位置不固定，无规律可循 皂苷中常见糖的种类 1.葡萄糖(β-D-glucose; Glc) 2.半乳糖(β-D-galactose ; Gal) 3.L-阿拉伯糖(α-L-arabinose) 4.D-木糖(β-D-xylose) 5.α-L-鼠李糖(α-L-rhamnose) 和β-D-奎诺糖(β-D-quinovonose) 6.β-D-夫糖(β-D-fucose) 和α-L-夫糖(α-L- fucose) 9.D-葡萄糖醛酸(D- glucronic acid) 10.D-半乳糖醛酸(D- galactocuronic acid) 11.D-阿拉伯糖（呋喃型）(Arabinofranose) 12.D-芹菜糖(apiose) 制备液相色谱是皂苷分离纯化过程中的必要手段 1.柱效高、制备的化合物纯度高。 2.制备量大、分离速度快。 3.没有制备液相色谱很难进行复杂结构皂苷的结构研究和生物活性研究。 皂苷的生物活性 1.溶血活性 2.降血脂和降低胆固醇 3.表面活性剂作用 4.抗病毒活性 5.抗肿瘤活性 6.抗炎活性 7.抗菌活性 8.抗血小板聚集 二、皂苷的提取、分离和纯化 1. 提取和分离 2. 分离过程中采用的柱色谱 3. 反相液相色谱的应用 2.1 提取分离 （1）提取的溶剂 （2）分配萃取 （3）HP-20树脂柱色谱的初步分离 流程图 HP-20树脂柱色谱的初步分离 2.1分离过程中采用的柱色谱 2.1.1硅胶柱色谱 （1）吸附色谱：CHCl3/MeOH （2）分配色谱： CHCl3/MeOH/H2O 2.1.2 凝胶柱色谱 （1）saphdex LH-20 （2）TOYOperal HW-40 （3）MCI Gel 2.1分离过程中采用的柱色谱 2.1.3 反相C18柱色谱 （1）常压C18柱色谱 （2）中压C18柱色谱 （3）高压C18柱色谱 三、正相、 反相制备液相色谱的应用 制备液相应用的简介 分析型液相色谱的应用 半制备液相色谱的应用 制备液相色谱的应用 (1)正相制备液相色谱的应用 色谱柱填料：硅胶;10～15um 流动相:CHCl3/MeOH/H2O；BtOH/EtOH/H2O 检测器：RI 柱直径：10mm-50mm. 柱长：100mm-400mm. 流速： (2)反相制备液相色谱的应用 1.色谱柱填料：反相硅胶C18; C8 2.粒度的选择：5-40um 3.孔径的选择：100、120、200 4.不同公司的产品分离的效果不同。 5.流动相的选择:CH3OH/H2O;CH3CN/H2O 6.检测器：UV210nm; RI 三、皂苷的结构解析 研究的背景 1.传统的化学方法（七十年代前） 2.传统的化学方法结合波谱方法（1970-1980s） 3.现代核磁共振技术和化学方法（1980s-） 现代核磁共振技术和化学方法在皂苷解析中的应用 1.皂苷的结构特征 （1）糖的特征和端基碳的构型 （2）糖链中糖和糖的联接及糖链的连接位置 （3）苷元的结构 （4）皂苷中联接的片段结构 2.核磁共振波谱测试使用的试剂 1. Pyridine-d5; 2. DMSO-d6; 3. methanol-d4. 3.皂苷的波谱特征 （1）1D-1H-NMR spectra特征 ①糖的端基氢信号：δ4.5-6.4。 ②糖上的和苷元上的甲基信号：δ1.3-1.5。 ③糖上的其他氢信号： δ3.4-4.9。 ④苷元上连氧氢信号： δ3.0-4.0。 ⑤苷元上C12烯氢信号： δ5.4t。 ⑥苷元的其它信号： δ3.2. 3.皂苷的波谱特征 （2）1D-13C-NMR spectra特征 ①糖的端基碳信号：δ95.0-111.0。 a.